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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>三羧酸循環(huán)系列>> 線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒微量法
丙酮酸脫氫酶(PDH)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào) | BJ-01611147-1 |
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優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611147-1 |
商品介紹:
測(cè)定意義: CA是線粒體三羧酸循環(huán)的第一個(gè)中間產(chǎn)物,由檸檬酸合酶催化乙酰CoA與草酰乙酸合成,其含量是三羧酸循環(huán)強(qiáng)度的主要指標(biāo)之一。 配合測(cè)定丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性、乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量,其中(1)丙酮酸含量和丙酮酸脫氫酶活性變化可以反映糖酵解進(jìn)行程度,(2)綜合分析丙酮酸含量、丙酮酸脫氫酶活性和乙酰CoA含量變化可以反映脂肪酸β-氧化途徑提供的乙酰CoA情況,(3)乙酰CoA含量、檸檬酸合酶活性和CA含量變化可以反映三羧酸循環(huán)進(jìn)行狀況。 測(cè)定原理: CA在檸檬酸裂解酶的作用下,生成α-酮酸(草酰乙酸);在弱酸性條件下,α-酮酸進(jìn)一步與苯肼反應(yīng),生成相應(yīng)的α-酮酸苯腙;α-酮酸苯腙在330nm處有吸收峰,該波長(zhǎng)下吸光度的變化程度可反映出CA的含量。 自備儀器和用品: 可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96孔板、研缽、蒸餾水。 |
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
白介su-1受體相關(guān)激酶2臭曲霉酸澀變種神經(jīng)元凋亡抑制蛋白(NAIP)elisa定量檢測(cè)試劑盒
白介su-1受體拮抗劑抗原葡萄座腔菌兔轉(zhuǎn)錄激活因子-1(ATF-1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
整合suα7抗原解脂亞羅酵母兔β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)elisa定量檢測(cè)試劑盒
粘附分子整合suβ1抗原球狀枝孢兔端粒酶相關(guān)蛋白1(TEP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
粘附分子整合suα5抗原Bacillus safensis Satomi et al. 猴周期su依賴性激酶5(CDK5)elisa定量檢測(cè)試劑盒
整合suαV抗原啤酒酵母猴嗜酸性白血球相關(guān)之RNA水解酵su家族成員12(EAR12)elisa定量檢測(cè)試劑盒
蛋白質(zhì)酪an酸激酶JAK-1抗原球孢白僵菌兔血管緊張suIII(ANG III)elisa定量檢測(cè)試劑盒
蛋白質(zhì)酪an酸激酶JAK-2抗原金針菇8號(hào)兔鞘磷脂脂質(zhì)蛋白1(PLP1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
磷酸化蛋白酪an酸激酶JAK-2抗原麥克默多生孢八疊球菌猴脫氧核糖核酸酶I(DNase-I)elisa定量檢測(cè)試劑盒
c-Jun氨基末端激酶1/3多肽抗原樟疫霉接觸蛋白1(CNTN1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
磷酸化氨基末端激酶1/2/3(pJNK1/2/3)抗原免疫球蛋白G Fc段低親和力受體IIIa(FcγR3A)elisa定量檢測(cè)試劑盒
Ki-67 Antigen柳屬半明小黑腐皮殼菌猴纖維蛋白原相關(guān)蛋白1(FGL1)elisa定量檢測(cè)試劑盒
腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子抗原大腸埃希菌猴GATA結(jié)合蛋白4(GATA4)elisa定量檢測(cè)試劑盒
磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原釀酒酵母猴二肽基肽酶VI (DPP6)elisa定量檢測(cè)試劑盒
磷酸化腸道內(nèi)富含的Kruppel樣因子5抗原小孢毛霉周期su依賴性激酶4(CDK4)elisa定量檢測(cè)試劑盒
線粒體檸檬酸(MCA)含量測(cè)試盒微量法Apelin 13(AP13)試劑盒 Anti-MAP2K3 Antibody囊泡相關(guān)膜蛋白3
S100鈣結(jié)合蛋白B (S100B)試劑盒 Anti-MAP2K3 Antibody空泡分選蛋白18
GATA結(jié)合蛋白3(GATA3)試劑盒Anti-MAP2K4 Antibody磷酸化波形蛋白
基質(zhì)金屬蛋白mei抑制因子3(TIMP-3)試劑盒Anti-MAP2K4 Antibody磷酸化波形蛋白
甲狀旁腺(PTH)試劑盒Anti-MAP2K7 Antibody鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1
硒蛋白1(SEP1)試劑盒Anti-MAP2K6 Antibody磷酸化鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1
血小板激活因子(PAF)試劑盒Anti-MAP2K6 Antibody磷酸化鳥(niǎo)苷酸轉(zhuǎn)換因子VAV1
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