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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 碳水化合物激酶結構域蛋白質抗體 |
英文名稱 | CARKD |
貨號 | BJ-K8413 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應。抗體是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
E2F3 轉錄因子E2F-3紫蘇油2--5-溴嘧啶Human CLDN14 (Claudin 14) 檢測試劑盒
E2F4 轉錄因子E2F-4肉桂油四氟對二Human CD109 (Cluster of Differeiation 109) 檢測試劑盒
E2F5 轉錄因子E2F-5薄荷素油四氟對二Human CD30 (Cluster of Differeiation 30) 檢測試劑盒
E2F6 轉錄因子E2F6人參莖葉皂苷四氟對二Human CD97 (Cluster of Differeiation 97) 檢測試劑盒
E2 tag E2 tag標簽蔓荊子黃素2-氨基-3-(三氟甲基)吡啶Human CD99 (Cluster of Differeiation 99) 檢測試劑盒
HPV16 E7 protein 人瘤病16型E7石吊蘭素2-氨基-3-(三氟甲基)吡啶Human CD4 (Cluster of Differeiation 4) 檢測試劑盒
EAAT1/Glast 膠質細胞谷氨酸運載蛋白1茴香2-氨基-3-(三氟甲基)吡啶Human NOS2/iNOS (Nitric Oxide Syhase 2, Inducible) 檢測試劑盒
EAAT2 膠質細胞谷氨酸運載蛋白2次野鳶尾黃素2-氯-6-羥基甲Human CLDN3 (Claudin 3) 檢測試劑盒
補體C4d-A蛋白Porcine GLβ (Galactosidase Beta) 檢測試劑盒
補體C4b-A蛋白Porcine CKLFSF4 (Chemokine Like Factor Superfamily 4) 檢測試劑盒
磷酸化整合素β2/Iegrin β2Porcine PKC (Protein Kinase C) 檢測試劑盒
磷酸化整合素β2/Iegrin β2Porcine RK2 (Neurotrophic Tyrosine Kinase Receptor Type 2) 檢測試劑盒
4號染色體開放閱讀框28Porcine EFNA4 (Ephrin A4) 檢測試劑盒
陽離子通道相關蛋白2Porcine FGF9 (Fibroblast Growth Factor 9) 檢測試劑盒
陽離子通道相關蛋白3Porcine MPIF-1/CCL23 (Myeloid Progenitor Inhibitory Factor 1) 檢測試劑盒
液泡蛋白分選蛋白VPS13APorcine LBP (Lipopolysaccharide Binding Protein) 檢測試劑盒
碳水化合物激酶結構域蛋白質抗體蠟狀芽孢桿Porcine GOD (Glucose Oxidase) Kit
大腸埃希Porcine CD59 (Protectin) Kit
糙皮側耳Porcine Gal-6S (Galactose-6-Sulphatase) Kit
黑曲霉Porcine LTβR (Lymphotoxin Beta Receptor) Kit
松球殼孢Porcine MT (Matonin) Kit
黑根霉Porcine PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) Kit
盤長孢狀刺盤孢Porcine ANGPTL2 (Angiopoietin Like Protein 2) Kit
香蕉生假絲酵母Porcine NI1 (Troponin I Type 1, Slow Sketal) Kit
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