免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過(guò)0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過(guò)程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過(guò)分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對(duì)該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見(jiàn)偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對(duì)分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存?？贵w一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會(huì)影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見(jiàn)的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)?？贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類(lèi)別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過(guò)胎盤(pán)及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過(guò)胎盤(pán)進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過(guò)消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對(duì)理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類(lèi)沉淀。在生產(chǎn)上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Standard cou agar標(biāo)準(zhǔn)計(jì)數(shù)瓊脂成纖維細(xì)胞cDNA鹽酸替羅非班HCMV UL23/HHV5 UL23(Human Cytomegalovirus UL23 Gene)  人巨細(xì)胞病UL23抗原

Standard nutrie agar標(biāo)準(zhǔn)I營(yíng)養(yǎng)瓊脂人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNAL-別異亮氨酸DAD1 (dopamine D1 receptor)  多巴胺受體-D1抗原

Standard nutrie broth 標(biāo)準(zhǔn)I營(yíng)養(yǎng)瓊脂人臍動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞cDNACryoliteDRD3 receptor(dopamine D3 receptor)  多巴胺受體-D3抗原

Standard 11 nutrie agar標(biāo)準(zhǔn)11營(yíng)養(yǎng)瓊脂人臍靜脈平滑肌細(xì)胞cDNACryoliteDRD4 receptor peptide  多巴胺受體-D4抗原

Staphylococcus enrichme broth( base)acc.to BAIRD葡萄狀球菌富集肉湯（基礎(chǔ)）人臍動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞cDNA氟化鋁三水合物DRD5 receptor(dopamine D5 receptor)  多巴胺受體-D5抗原

TB medium acc.to LOENSTIN-JENSEN( base) TB培養(yǎng)基（基礎(chǔ)）人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞總RNAN-乙酰-D-蛋氨酸DBH (Dopamine- Beta-Hydroxylase)  多巴胺β羥化酶（抗原）

TCBS agar Vibrio selective agar TCBS瓊脂/弧菌選擇瓊脂人腦血管平滑肌細(xì)胞總RNAN-乙酰-D-蛋氨酸DCC (Deleted in colorectal cancer gene)  結(jié)直腸癌缺失基因抗原

Test agar fo the residue test acc.to KUNDRAT測(cè)試瓊脂（殘余測(cè)試）人腦血管周細(xì)胞總RNA2,3-二溴酰胺DCX(Doublecortin)  雙皮質(zhì)素抗原

ILT2/CD85j/FITC  熒光素標(biāo)記細(xì)胞表面免疫球蛋白樣轉(zhuǎn)錄因子2IgGCD8β鏈（CD8-β）3-氟-4-羥基甲酸Rat GALR4 (Galanin Receptor4) 檢測(cè)試劑盒

ILTV/FITC  熒光素標(biāo)記抗雞傳染性喉氣管炎病IgG6號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框11-氯-2-氟-4-Rat IL-2Rβ (Ierleukin-2 Receptor-β) 檢測(cè)試劑盒

IMP3/FITC  熒光素標(biāo)記胰島素樣生長(zhǎng)因子ⅡmRNA結(jié)合蛋白3IgGγ晶狀體蛋白S/γS-crystallin1-氯-2-氟-4-Rat PGA (Pepsinegen A) 檢測(cè)試劑盒

ING1/p33/FITC  熒光素標(biāo)記生長(zhǎng)抑制因子基因1IgG9號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框72三氟甲氧基基異酸酯Rat PGC (PepsinegenC) 檢測(cè)試劑盒

Inhibin Alpha/FITC  熒光素標(biāo)記抑制素αIgG鈣粘附分子10三氟甲氧基基異酸酯Rat -Pro-ANP (N-Terminal Pro-Atrial Natriuretic Peptide) 檢測(cè)試劑盒

Inhibin BetaA/FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βAIgGR Cadherin/CDH4三氟甲氧基基異酸酯Rat PINP (Procollagen Type I N-Terminal Propeptide) 檢測(cè)試劑盒

Inhibin Beta B /FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βBIgG大鼠細(xì)小病H-1株(H-1)1-氟-4-Rat Rt3 (Reverse Triiodothyronine) 檢測(cè)試劑盒

Inhibin Beta C /FITC  熒光素標(biāo)記抑制素βCIgG22號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框91-氟-4-Rat TGM2 (Transglutaminase 2, Tissue) 檢測(cè)試劑盒
8號(hào)染色體開(kāi)放閱讀框12抗體中華芽孢桿Mouse FOS (V-Fos FBJ Murine Osteosarcoma Viral Oncogene Homolog)  Kit   

枯草芽孢桿Mouse VASPIN (Visceral Adipose Specific Serine Protease Inhibitor)  Kit

山楂生葉點(diǎn)霉Mouse VF (Visfatin)  Kit

巴氏醋桿Mouse vWF (von Willebrand Factor)  Kit

產(chǎn)氨短桿Mouse α Manase (α mannosidase)  Kit

葡紫紅菇Mouse α1-AGP (α1-Acid glycoprotein)  Kit

紫紅曲霉Mouse α1-MG (α1-Microglobulin)  Kit

凍土毛霉原變型Mouse α2-AP (α2-Aiplasmin)  Kit