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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 有絲分裂激酶A抗體 |
英文名稱 | Aurora A |
貨號 | BJ-K6563 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。?
抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
PKC beta 1/2 蛋白激酶C beta 1/2白術內酯Ⅱ2-氯-4-甲基-5-硝基吡啶Human GADL1 (Glutamate Decarboxylase Like Protein 1) 檢測試劑盒
phospho-PKC (Thr500) 磷酸化蛋白激酶C(T500)白術內酯III2-氯-4-甲基-5-硝基吡啶Human GAD1 (Glutamate Decarboxylase 1) 檢測試劑盒
phospho-PKC beta 1/2(Thr500) 磷酸化蛋白激酶C β1/β2(Thr500)蟾靈2-氯-4-甲基-5-硝基吡啶Human PEX2 (Peroxisomal Biogenesis Factor 2) 檢測試劑盒
Phospho-PKC alpha/beta II (Thr638/641) 磷酸化蛋白激酶C α/β2根皮素2-氯-4-硝基吡啶Human PPAR-δ (Peroxisome Proliferator Activated Receptor Delta) 檢測試劑盒
PKC alpha 蛋白激酶C α膽紅素2-氯-4-硝基吡啶Human NUP62 (Nucleoporin 62kDa) 檢測試劑盒
PLCG 2/PLC gamma 2 磷酯酶Cγ2大葉茜草素2-氯-4-硝基吡啶Human PCNA (Proliferating Cell Nuclear Aigen) 檢測試劑盒
Phospho-PLC gamma 2 (Tyr1217) 磷酸化磷酯酶Cγ2斷血流皂苷A2-氯-5-甲基-3-硝基吡啶Human RANκ (Receptor Activator of Nuclear Factor Kappa B) 檢測試劑盒
Phospho-PLC gamma 2 (Tyr759) 磷酸化磷酯酶Cγ2羥基紅花黃色素A2-氯-5-甲基-3-硝基吡啶Human NUMA1 (Nuclear Mitotic Apparatus Protein 1) 檢測試劑盒
磷酸化GATA結合蛋白3Monkey CK-20/KRT20 (Cytokeratin 20) 檢測試劑盒
磷酸化GATA結合蛋白4Monkey cPLA2 (Cytosolic Phospholipase A2) 檢測試劑盒
GATM蛋白Monkey CLEC2C (C-Type Lectin Domain Family 2 Member C) 檢測試劑盒
γ1氨基丁酸受體GABAA Rβ1Monkey PGM (Phosphoglucomutase) 檢測試劑盒
G蛋白修補結構域蛋白2Monkey f-Hb (Free Haemoglobin) 檢測試劑盒
谷胱甘肽過氧化酶1Monkey SLC/CCL21 (Secondary Lymphoid Tissue Chemokine) 檢測試劑盒
粒細胞-巨噬細胞克隆刺激因子Monkey C3b (Compleme Fragme 3b) 檢測試劑盒
G蛋白偶聯受體GPR62蛋白Monkey GC (Glycocalicin) 檢測試劑盒
有絲分裂激酶A抗體Curvularia│lunata提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25℃
Streptomyces│melanochromogenes分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no土壤微生物資源調查及分類學研究培養(yǎng)基: 12生長條件: 28℃真空冷凍干燥法
Streptomyces│subrutilus分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0012生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Streptococcus│suis分離基物: 病變的內臟組織安全等級: 2模式株: no研究培養(yǎng)基: 396生長條件: 37真空冷凍干燥法;
紅色紅曲霉種屬: Monascus│ruber提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0013生長條件: 30-32℃液氮超低溫凍結法;礦物油法
Alcaligenes│aquatilis分離基物: 沉積物/活性污泥提供形式: 凍干物模式株: no潛在的反硝化/以硝酸根為電子受體分離,可用于生物脫氮研究培養(yǎng)基: 472生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
Bacillus│weihenstephanensis分離基物: 造紙廠附近長期堆積物提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no纖維素降解培養(yǎng)基: 0002生長條件: 28℃-80℃冰箱凍結法;定期移植法
Bacillus│aquimaris分離基物: 沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no近海細培養(yǎng)基: 471生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法;真空冷凍干燥法
綠色木霉=木素木霉種屬: Trichoderma│viride提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃
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