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免疫熒光技術的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內,保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產品名稱 | 雙調蛋白(結腸直腸細胞源性生長因子)抗體 |
英文名稱 | Amphiregulin |
貨號 | BJ-K6576 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產品僅用于科研保存前需經除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結合,在體內導致生理或病理效應;在體外產生各種直接或間接的可見的抗原抗體結合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結合部位與抗原結合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結合后,借助暴露的補體結合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結合不同種的細胞,產生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質,也具有刺激機體產生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質凝固變性的物質,均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經透析法將其純化。
Polycystin 2 多囊腎蛋白22”-O-沒食子?;鸾z桃苷3,4-二甲氧基肉桂酸Human LOXL4 (Lysyl Oxidase Like Protein 4 ) 檢測試劑盒
PP-1B 蛋白磷酸酯酶-1B9-甲氧基喜樹堿3,4-二甲氧基肉桂酸Human FRSF1B (Tumor Necrosis Factor Receptor Superfamily, Member 1B) 檢測試劑盒
PP2A alpha 蛋白質磷酸酶-2A鹽酸石蒜堿3,4-二甲氧基肉桂酸Human ACCPA (ai-cyclic citrullinated peptide aibody) 檢測試劑盒
PP2A alpha 蛋白質磷酸酶-2A光甘草定3-氟-4-(三氟甲基)甲Human LL-37 (Aibacterial Protein LL-37) 檢測試劑盒
PP2Ac 磷酸酯酶-2Ac橙黃決明素羥基檸檬酸Human Tα1 (Thymosin-α1) 檢測試劑盒
PPAR-delta/beta D型-過氧化酶活化增生受體荷葉堿羥基檸檬酸Human PS1 (Presenilin 1) 檢測試劑盒
PPAR alpha α型-過氧化酶活化增生受體鷹嘴豆芽素A利托君鹽酸鹽Human PACAP-38 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 38) 檢測試劑盒
PPAR Gamma 過氧化酶活化增生受體γ10-羥基喜樹堿利托君鹽酸鹽Human PACAP-27 (Pituitary Adenylate Cyclase Activating Polypeptide 27) 檢測試劑盒
葡萄糖果糖還原酶2Monkey PROC (Protein C) 檢測試劑盒
膠質細胞系源性神經營養(yǎng)因子受體α1樣蛋白Monkey BLNK (B-Cell Linker Protein) 檢測試劑盒
GHDC蛋白Monkey TPP1 (Tripeptidyl Peptidase I) 檢測試劑盒
甘油激酶5Monkey CgA (Chromogranin A/Pancreastatin) 檢測試劑盒
β半乳糖苷酶1樣蛋白3Monkey IL-18 (Ierleukin 18) 檢測試劑盒
糖皮質激素誘導轉錄蛋白1Monkey GPI (Glucose 6 Phosphate Isomerase) 檢測試劑盒
腦膠質瘤發(fā)病相關蛋白2Monkey GzmB (Granzyme B) 檢測試劑盒
神經節(jié)苷脂誘導分化相關蛋白1Monkey MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) 檢測試劑盒
雙調蛋白(結腸直腸細胞源性生長因子)抗體Streptococcus│pneumoniae提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no制造診斷血清 IV培養(yǎng)基: CM0109(10%脫纖維羊血營養(yǎng)瓊脂)生長條件: 37℃真空冷凍干燥法
脆弱鏈霉種屬: Streptomyces│fragilis分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: yesType strain. Produces azaserine培養(yǎng)基: 0038生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Aureobasidium│pullulans分離基物: 生物樣/桐花樹/葉提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no近海酵母培養(yǎng)基: 513生長條件: 28℃液氮超低溫凍結法;-80℃冰箱凍結法
Escherichia│coli提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no主要用于根瘤固氮機理的研究培養(yǎng)基: 2生長條件: 37℃真空冷凍干燥法;定期移植法
Saccharomyces│cerevisiae提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no釀造酒精。培養(yǎng)基: CM0013生長條件: 28-30℃真空冷凍干燥法
Pseudomonas│fluorescens提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0002生長條件: 30℃液氮超低溫凍結法;真空冷凍干燥法
Glomerella│cingulata (Stoneman) Spauld. & H. Schrenk分離基物: 喜樹提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 28定期移植法
Pleurotus│cystidiosus提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0017生長條件: 25℃液氮超低溫凍結法;礦物油法
Aspergillus│terreus Thom分離基物: 土壤提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法
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