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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>生化檢測(cè)試劑盒>>氨基酸代謝系列>> 天冬酰胺合成酶(AS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法
貨號(hào) | BJ-01611106-2 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測(cè)。
產(chǎn)品名稱 | 檢測(cè)方法 | 規(guī)格 | 貨號(hào) |
天冬酰胺合成酶(AS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法 | 可見(jiàn)分光光度法 | 50管/48樣 | BJ-01611106-2 |
商品介紹:
測(cè)定意義: 天冬酰胺合成酶是廣泛存在于生物體內(nèi)的一類氨基轉(zhuǎn)移酶,催化谷氨酞胺的氨基向天冬氨酸轉(zhuǎn)移。當(dāng)植物處于氨毒時(shí)天冬酞胺的形成是一種解毒反應(yīng)。 測(cè)定原理: AS催化L-天冬酰胺水解成L-天冬氨酸和氨,利用奈氏試劑檢測(cè)氨增加的速率,即可計(jì)算其酶活性。 需自備儀器和用品: 臺(tái)式離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、冰和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡(jiǎn)便:全程約50分鐘,可測(cè)100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測(cè)紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測(cè)白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測(cè)組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測(cè)線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個(gè)月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測(cè)試面廣:可測(cè)動(dòng)物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測(cè)定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測(cè)定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測(cè)定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測(cè)定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測(cè)樣品-70℃可保存1個(gè)月。需注意反復(fù)凍融會(huì)導(dǎo)致SOD部分失活。
一個(gè)試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時(shí)適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測(cè)效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時(shí)所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時(shí),標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無(wú)需處理的樣品時(shí),宜使用試劑盒提供的SOD檢測(cè)緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會(huì)對(duì)本試劑盒的檢測(cè)產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會(huì)使測(cè)定出來(lái)的吸光度顯著升高。此時(shí)盡管樣品沒(méi)有顏色,如果設(shè)置了使用說(shuō)明中的空白對(duì)照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
膠體金標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體榛色青霉環(huán)吡酮Ciclopirox olamine
FITC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體絲蘭輪紋斑菌金諾芬Jin Nuofen
性磷酸酶(AP)標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體塊鱗灰傘Bezafibrate
PE-Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體石吊蘭Shi Diaolan
PE-CY5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體*灰葡萄孢鎖陽(yáng)Cynomorium songaricum Rupr
APC標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體產(chǎn)單核李氏桿菌卷柏(墊狀卷柏)Selaginella?(Selaginella pulvinata)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體產(chǎn)氣莢膜梭菌 suE型石菖蒲Shi Changpu
Alexa Fluor 488標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體多產(chǎn)色鏈霉菌桃金娘根Downy Rosemyrtle root
Alexa Fluor 555標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體雙孢蘑菇(白蘑菇、洋蘑菇)塞隆骨Theron bone
Alexa Fluor 647標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體新月彎孢苦菜子Bitter?vegetable
PE-Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體博斯氏菌屬馬蘭草Ma Lancao
PE-Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體茶藨子葡萄座腔菌半夏Banxia
Cy5.5標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體擬可可毛球二孢紅大戟Knoxia valerianoides
Cy7標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體嗜糖土地芽孢桿菌冬凌草Rabdosia rubescens
Cy3標(biāo)記的鼠抗人IgG單克隆抗體乳桿菌屬小葉榕Ficus microcarpa
天冬酰胺合成酶(AS)測(cè)試盒可見(jiàn)分光光度法成纖維生長(zhǎng)因子7(FGF7/KGF)試劑盒Anti-IL2 Antibody5色an酸羥化酶2
纖調(diào)蛋白(FMOD)試劑盒 Anti-IL2 Antibody硫氧還蛋白11
鈣調(diào)su(CAM)試劑盒 Anti-IL22 Antibody微管蛋白4α
心肌營(yíng)養(yǎng)su合成酶/心磷脂合酶(CLS)試劑盒 Anti-IL22 Antibody動(dòng)力蛋白輕鏈
鋅結(jié)合α2-糖蛋白1(αZGP1)試劑盒Anti-IL2 Antibody腫瘤壞死因子誘導(dǎo)蛋白8樣蛋白2/TNFα-IP 8L2
受磷蛋白(PLN)試劑盒Anti-IL22 Antibody血小板生成su受體
膜橋蛋白試劑盒 Anti-IL2 Antibody跨膜絲an酸蛋白mei5
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤(rùn)管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會(huì)凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤(rùn)管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動(dòng),每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動(dòng)一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時(shí),不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時(shí),直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時(shí)左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時(shí)所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對(duì)較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時(shí)可能會(huì)出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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