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貨號 | BJ-01611191-1 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
磷脂酶D(PLD)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611191-1 |
商品介紹:
測定意義 磷脂酶D(EC3.1.4.4)即磷脂酰dan堿水解酶,是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱,廣泛存在于高等動植物和細(xì)菌等多種生物體中,具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。 測定原理 磷脂酶D催化水解磷脂酰dan堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和dan堿,dan堿在dan堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫,過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將4-氨基安替bi林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì),在500nm處有特征吸收峰。 自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器 天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。
一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
催乳su緊密毛霉小鼠白介su12(IL-12)elisa定量檢測試劑盒
孕酮固氮螺菌屬小鼠白介su13(IL-13)elisa定量檢測試劑盒
游離T4谷an酸棒狀桿菌小鼠單核趨化蛋白2(MCP-2/CCL8)elisa定量檢測試劑盒
三甲狀腺原an酸(T3)鞘氨盒菌屬小鼠蕈型受體M1(CHRM1)elisa定量檢測試劑盒
白G Fc段受體Ⅱ堅(jiān)硬芽孢桿菌小鼠間粘附分子3(ICAM-3/CD50)elisa定量檢測試劑盒
兔粒集落激因子蘇云金芽孢桿菌庫爾斯塔克亞種小鼠膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(FPN)elisa定量檢測試劑盒
甲狀腺su(T4)葡萄座腔菌小鼠粘蛋白/粘液su5AC(MUC5AC) elisa定量檢測試
魚類主要組織相容性復(fù)合體枯草芽孢桿菌小鼠抵抗su(RETN)elisa定量檢測試劑盒
大鼠c-Jun氨基末端激酶粉紅單端孢霉小鼠B淋巴瘤(BCL 10)elisa定量檢測試劑盒
小鼠絲an酸/蘇an酸蛋白磷酸酶檸檬黃色農(nóng)球菌小鼠免疫球蛋白A(IgA)elisa定量檢測試劑盒
人血清促甲狀腺su(TSH)油菜菌核病菌小鼠免疫球蛋白G(IgG)elisa定量檢測試劑盒
甲狀腺球蛋白抗體(TG抗體)溶桿菌小鼠間粘附分子1(ICAM-1/CD54)elisa定量檢測試劑盒
甲狀腺微粒體抗體(TM抗體)Erwinia amylovora小鼠低密度脂蛋白免疫復(fù)合物(LDL-IC)elisa定量檢測試劑盒
甲胎蛋白定量(一/二步夾心法) 運(yùn)動節(jié)桿菌小鼠白血病抑制因子受體(LIFR)elisa定量檢測試劑盒
甲胎蛋白定性金龜子綠僵菌小鼠L選擇su(SELL)elisa定量檢測試劑盒
磷脂酶D(PLD)測試盒微量法白介su11(IL-11)試劑盒Anti-PAPPA Antibody酪an酸蛋白激酶Fyn(同步原癌基因)
B連接蛋白(BLNK)試劑盒 Anti-PAR4/Pawr Antibody頂端體相關(guān)蛋白7
甘露聚糖結(jié)合凝集su相關(guān)絲an酸蛋白mei2(MASP2)試劑盒Anti-Parkin(PARK2) Antibody血清應(yīng)答因子結(jié)合蛋白1
尿su酶相關(guān)蛋白C(UreC)試劑盒 Anti-PARK7 Antibody磷酸化血清應(yīng)答因子
不對稱二甲基精an酸(ADMA)試劑盒 Anti-PARK7 Antibody(PB0341)應(yīng)激誘導(dǎo)磷蛋白1
血紅蛋白β(HBβ)試劑盒 Anti-PARK7 Antibody14號染色體開放閱讀框174
P選擇su(SELP)試劑盒Anti-PARP2 Antibody中斷位點(diǎn)蛋白STIL
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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