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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | AU5 tag標簽抗體 |
英文名稱 | AU5 tag |
貨號 | BJ-K7202 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導(dǎo)表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用??贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
SERINC1 aibody65 kDaQ9NRX5Human
SERINC2-Specific aibody65 kDaQ96SA4Human, Mouse, Rat
SERINC3 aibody67 kDaQ13530Human, Mouse, Rat
SERP1 aibody10 kDaQ9Y6X1Human, Mouse, Rat
SERPINA10 aibody51 kDaQ9UK55Human, Mouse, Rat
SERPINA10 aibody51 kDaQ9UK55Human
Serpina3k aibody50-60 kDa P07759Mouse
Lithium acetate dihydrate 鋰 二水合物 6108-17 分子式:CH3CoOLi.2H2O 分子量:102.02
Cerium(III) nitrate hexahydrate 硝鈰(III) 六水合物 102941 分子式:CeN3O9.6H2O 分子量:434.22
Iron(III) phosphate dihydrate 磷鐵(III) 二水合物 13463-10-0 分子式:FePo4.2H2O 分子量:186.85
Ethylenediaminetetraacetic acid iron(III) sodium salt hydrate 二胺四 鐵(III) 鈉鹽 水合物 157081-5 分子式:C10H12FeN2NaO8.H2O 分子量:367.05
AU5 tag標簽抗體Leinula│edodes (Berk.) Pegler分離基物: 子實體提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25定期移植法
Ceriporiopsis│subvermispora提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃
Verticillium│sp.提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no培養(yǎng)基: 14生長條件: 25℃-80℃冰箱凍結(jié)法;定期移植法;其他
Streptomyces│sp.分離基物: 土壤提供形式: 凍干物安全等級: 1模式株: no抗綠膿桿培養(yǎng)基: CM0027生長條件: 28C真空冷凍干燥
Salmonella│typhimurium提供形式: 凍干物安全等級: 2模式株: no培養(yǎng)基: 219生長條件: 30℃真空冷凍干燥法
Microbacterium│testaceum分離基物: 沉積物/深海沉積物提供形式: 凍干物模式株: no生物活性微生物/潛在的抗腫瘤活性培養(yǎng)基: 1003生長條件: 28℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
Pestalotiopsis│algeriensis分離基物: 茶枝提供形式: 斜面培養(yǎng)物安全等級: 1模式株: no植物病原培養(yǎng)基: 0014生長條件: 25-28℃液氮超低溫凍結(jié)法;礦物油法
Bradyrhizobium│japonicum (Kirchner) Jordan分離基物: 根際提供形式: 斜面培養(yǎng)物模式株: no益生培養(yǎng)基: 141生長條件: 32定期移植法
Exiguobacterium│sp.分離基物: 沉積物/深灰色與黑色相間沉積物提供形式: 凍干物模式株: no產(chǎn)酶微生物/產(chǎn)蛋白酶、淀粉酶、脂肪酶株(三丁酸甘油酯法)培養(yǎng)基: 471生長條件: 25℃液氮超低溫凍結(jié)法;-80℃冰箱凍結(jié)法;真空冷凍干燥法
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