免疫熒光技術(shù)的實(shí)驗(yàn)步驟：
一、準(zhǔn)備好試劑與儀器：
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標(biāo)記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實(shí)驗(yàn)步驟
1.滴加0.01mol/L，pH7.4的PBS于待檢標(biāo)本片上，十分鐘后棄去，使標(biāo)本保持一定濕度。
2.滴加適當(dāng)稀釋的熒光標(biāo)記的抗體溶液，使其*覆蓋標(biāo)本，置于有蓋搪瓷盒內(nèi)，保溫一定時(shí)間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片，置玻片架上，先用0.01mol/L，pH7.4的PBS沖洗后，再按順序過0.01mol/L，pH7.4的PBS三缸浸泡，每缸三到五分鐘，并不停地?fù)u晃振蕩。
4.取出玻片，用濾紙吸去多余水分，但不使標(biāo)本干燥，加一滴緩沖甘油，以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標(biāo)本的特異性熒光強(qiáng)度。
詳細(xì)介紹：

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抗體的制備過程：
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動(dòng)物
常用于制備抗血清的動(dòng)物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量生產(chǎn)時(shí)需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動(dòng)脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進(jìn)行保存。抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價(jià)，而真空干燥保存時(shí)間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習(xí)性：
(1)結(jié)合特異性抗原：抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別，就在于抗體能與相應(yīng)抗原發(fā)生特異性結(jié)合，在體內(nèi)導(dǎo)致生理或病理效應(yīng);在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)。抗體是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補(bǔ)體：抗體與相應(yīng)抗原結(jié)合后，借助暴露的補(bǔ)體結(jié)合點(diǎn)去激活補(bǔ)體系統(tǒng)、激發(fā)補(bǔ)體的溶菌、溶細(xì)胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，產(chǎn)生不同的疚，參與免疫應(yīng)答。
(4)可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動(dòng)免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺激機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上常可用硫酸銨或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
Cetrimide agar Pseudomomas selective agar (base)人氣管上皮細(xì)胞裂解物4'-氟-2'-羥基苯乙酮r-GST(Recombinant Glutathione S-T Ahents)  重組谷胱甘肽轉(zhuǎn)移酶GST標(biāo)簽蛋白

溴棕*銨瓊脂/假單胞菌選擇培養(yǎng)基人小氣道上皮細(xì)胞裂解物4'-氟-2'-羥基苯乙酮P4(Caspase-4)  半胱胺酸蛋白酶蛋白-4抗原

CHAPMAN agar Staphylococcus selective agar 111 acc.to CHAPMAN人肺成纖維細(xì)胞裂解物1-芐基-3-哌啶Trk B  神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）

查普曼瓊脂/葡萄狀球菌選擇瓊脂人支氣管平滑肌細(xì)胞裂解物1-芐基-3-哌啶GDF8/MSTN(growth differntiation factor 8)  重組生長分化因子8/肌肉抑制素

China blue-lactose agar 中國藍(lán)乳糖瓊脂人氣管平滑肌細(xì)胞裂解物2,5-二溴-3-十二烷基噻吩Trk B  神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）

Reinforced clostridial agar(RCM)梭狀芽孢桿菌加強(qiáng)瓊脂人骨骼肌細(xì)胞裂解物2,5-二溴-3-十二烷基噻吩Insulin protein (Active)  重組人胰島素細(xì)胞因子

Differential reinforced clostridial broth 梭狀芽孢桿菌鑒別加強(qiáng)肉湯人骨骼肌衛(wèi)生細(xì)胞裂解物(S)-(+)-2,3-二氨基酸 鹽酸鹽Trk C  神經(jīng)生長因子受體的一種（抗原）

Reinforced clostridial medium(RCM)梭狀芽孢桿菌加強(qiáng)培養(yǎng)基人骨骼肌成肌細(xì)胞裂解物(S)-(+)-2,3-二氨基酸 鹽酸鹽TSHR (Thyroid stimulating hormone receptor)(NT)  促甲狀腺素受體（抗原）

HSL/FITC  熒光素標(biāo)記荷爾蒙敏感脂肪酸IgG磷酸化細(xì)胞周期檢測點(diǎn)激酶1色胺鹽酸鹽Rat TPOR (Thrombopoietin Receptor) 檢測試劑盒

Phospho-HSL (Ser552)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG磷酸化抑癌基因p16色胺鹽酸鹽Rat TPO (Thrombopoietin) 檢測試劑盒

Phospho-HSL (Ser563) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG磷酸化抑癌基因p16色胺鹽酸鹽Rat TSP-1 (Thrombospondin 1) 檢測試劑盒

Phospho-HSL (Ser565) /FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG磷酸化抑癌基因p16N-(叔丁氧羰基)-D-谷氨酸1-苯甲酯Rat TXB2 (Thromboxane B2) 檢測試劑盒

Phospho-HSL (Ser660)/FITC  熒光素標(biāo)記磷酸化荷爾蒙敏感脂肪酶IgG磷酸化CREB-1N-(叔丁氧羰基)-D-谷氨酸1-苯甲酯Rat TXB3 (Thromboxanes B3) 檢測試劑盒

HSP-20/FITC  熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-20IgG磷酸化粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子受體βBoc-Lys(Z)-OSuRat TPP (Thrombus Precursor Protein) 檢測試劑盒

HSP22/FITC  熒光素標(biāo)記熱休克蛋白-22IgG磷酸化N-鈣粘附分子Boc-Lys(Z)-OSuRat TSLP (Thymic Stromal Lymphopoietin) 檢測試劑盒

HSP-27/FITC  熒光素標(biāo)記HSP-27蛋白IgG磷酸化后期促進(jìn)復(fù)合蛋白3溴五氟苯Rat TARC (Thymus Activation Regulated Chemokine) 檢測試劑盒
8號染色體開放閱讀框55抗體泡囊側(cè)耳（鮑魚菇）Mouse SCT (Secretin)  Kit  

串珠鐮孢M(jìn)ouse sIgA (Secretory Immunoglobulin A)  Kit

紡錘形賴氨酸芽孢桿Mouse SEPP1 (Senoprotein P)  Kit

副豬嗜血桿Mouse SEMA7A (Semaphorin 7A)  Kit  

棘孢小單胞Mouse STK (serine/threonine protein kinase)  Kit

盤長孢狀刺盤孢M(jìn)ouse SAA (Serum amyloid A)  Kit

盤長孢狀刺盤孢M(jìn)ouse SESN1 (Sestrin 1)  Kit  

植物乳桿Mouse SESN2 (Sestrin 2)  Kit