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貨號 | BJ-01611140-1 |
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特別提醒:本產(chǎn)品僅供科研研究使用,不得用于人體臨床直接檢測。
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | BJ-01611140-1 |
商品介紹:
測定意義 α-KGDH(EC 1.2.4.2)廣泛存在于動物、植物微生物和培養(yǎng)細(xì)胞的線粒體中,是三羧酸循環(huán)調(diào)控關(guān)鍵酶之一,催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成琥珀酰fu酶A。 測定原理 α-KGDH催化α-酮戊二酸、NAD+ 和fu酶A生成琥珀酰fu酶A、 二氧化碳和 NADH,NADH在340 nm有特征吸收峰,以NADH的生成速率表示α-KGDH活性。 需自備的儀器和用品 紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水。 |
優(yōu)點(diǎn)如下:
1、快速簡便:全程約50分鐘,可測100例左右樣本。
2、取樣量微:本法取手指或耳垂等末梢血20ul~50ul即可測紅細(xì)胞中的SOD,只需2ml靜脈血可測白細(xì)胞中的SOD及血小板中SOD,只需50mg左右組織就可測組織勻漿、胞漿中的SOD,0.2g組織可測線粒體及微粒體中的SOD。
3、靈敏度高:IC50=0.05g/ml,是鄰苯三酚法的18倍。
4、穩(wěn)定性好:試劑盒2~8℃存放6個月有效。
5、再現(xiàn)性好:變異系數(shù)CV=1.7%。
6、回收試驗(yàn): X =103.3%。
7、受外界影響因素?。焊蓴_因素少,重復(fù)性強(qiáng)。
8、測試面廣:可測動物血液、組織、各種體液、灌流液等、各種培養(yǎng)細(xì)胞、細(xì)菌、植物組織、各種水產(chǎn)以及化妝品、保健品等,效果均佳。
測定步驟:
1、 酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至450nm。
2、 試劑三的稀釋:將試劑三用蒸餾水稀釋50倍,用多少配多少。(試劑三和蒸餾水1:49稀釋。
3、 工作液配制:在試劑一加入100μl試劑二,充分混勻。配好的試劑4℃避光可保存一周。(若一次性測定樣本較少,可按照實(shí)際用量將試劑一和試劑二按照20ml:0.1ml的比例混勻配制)
4、 將一瓶試劑四用5ml蒸餾水溶解(溶解后一周內(nèi)用完)。
5、 樣本測定(在96孔板中依次加入下列試劑)充分混勻,室溫靜置30min后,450nm處測定各管吸光值A(chǔ)。
注意事項(xiàng):
待測樣品-70℃可保存1個月。需注意反復(fù)凍融會導(dǎo)致SOD部分失活。
一個試劑盒如果不能在3次內(nèi)使用完畢,其中的WST-8需要在使用時適當(dāng)分裝,以避免反復(fù)凍融導(dǎo)致的檢測效果下降。
標(biāo)準(zhǔn)品稀釋時所用的稀釋液應(yīng)盡量與樣品一致。樣品用試劑盒提供的SOD樣品制備液制備時,標(biāo)準(zhǔn)品也宜使用SOD樣品制備液進(jìn)行稀釋;當(dāng)樣品為血液等無需處理的樣品時,宜使用試劑盒提供的SOD檢測緩沖液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品。
抗氧化物會對本試劑盒的檢測產(chǎn)生干擾,例如0.1mM ascorbic acid,5mM GSH都會使測定出來的吸光度顯著升高。此時盡管樣品沒有顏色,如果設(shè)置了使用說明中的空白對照3,就可以消除樣品中的抗氧化物的干擾。
粘著斑激酶抗原淡黃青霉豬磷脂酶B(PLB)elisa定量檢測試劑盒
磷酸化粘著斑激酶抗原槐栓菌猴過氧化物酶體增殖物激活受體δ( PPAR-δ)elisa定量檢測試劑盒
磷酸化粘著斑激酶抗原枯草芽胞桿菌豬微粒體谷胱S轉(zhuǎn)移酶1(MGST1)elisa定量檢測試劑盒
Fas活化的絲/蘇an酸激酶抗原芽孢桿菌豬生長調(diào)節(jié)致癌基因γ(GROγ)elisa定量檢測試劑盒
原纖維蛋白1抗原維多利亞維希尼克氏酵母豬中性粒性磷酸酶(NAP)elisa定量檢測試劑盒
纖維母生長因子4抗原微小鏈霉菌豬黑色su瘤關(guān)聯(lián)硫酸軟骨su蛋白聚糖(MCSP)elisa定量檢測試劑盒
纖維母生長因子5抗原細(xì)小磚紅鐮孢菌豬四旋蛋白30 (TSPAN30)elisa定量檢測試劑盒
衰老關(guān)鍵蛋白抗原沼澤類芽孢桿菌豬降鈣su基因相關(guān)肽(CGRP)elisa定量檢測試劑盒
FosB抗原不動桿菌豬神經(jīng)鈣黏蛋白(NCAD)elisa定量檢測試劑盒
FOS樣抗原2黃曲霉猴增殖相關(guān)蛋白2G4 (PA2G4)elisa定量檢測試劑盒
叉頭蛋白F1抗原大腸埃希氏菌猴殺菌性/通透性增加蛋白(BPI)elisa定量檢測試劑盒
插頭蛋白J1抗原釀酒酵母豬前列腺suE合酶2(PTGES2)elisa定量檢測試劑盒
FoxP1(T轉(zhuǎn)錄因子)抗原香菇豬非受體酪an酸激酶2(TNK2)elisa定量檢測試劑盒
插頭蛋白M1抗原大腸埃希氏菌豬T特異性鳥苷三磷酸酶(Tgtp)elisa定量檢測試劑盒
麻疹病抗原(麻疹病融合蛋白)英諾克李斯特氏菌豬內(nèi)凝集蛋白1(ITLN1)elisa定量檢測試劑盒
α酮戊二酸脫氫酶(αKGDH)測試盒微量法外基質(zhì)金屬蛋白mei誘導(dǎo)因子(EMMPRIN/CD147)試劑盒Anti-LIMK1 Antibody線粒體脫偶連蛋白3
垂體腺苷酸環(huán)化酶激活肽受體 (PACAPR)試劑盒Anti-LIF Antibody(PB0067)UBX結(jié)構(gòu)域域蛋白D2
成骨生長肽(OGP)試劑盒 Anti-LMAN1 Antibody泛su硫酯酶L3
功能相關(guān)抗原3(LFA-3/CD58)試劑盒 Anti-LIN28A Antibody泛su硫酯酶L1+3
磷脂酶C(PLC)試劑盒 Anti-LIPC Antibody人狀瘤病E6相關(guān)蛋白
血漿抗凝蛋白S(PS)試劑盒 Anti-LMNB2 Antibody泛su蛋白連接酶Q1
核因子-κB亞基p65(NF-κB p65)試劑盒Anti-LMO1 Antibody泛su蛋白連接酶U
實(shí)驗(yàn)方法學(xué):
一、肝素的配制:
市售肝素凍干粉140單位/mg,1克瓶裝,每瓶140,000單位,稱取0.1克肝素凍干粉,加生理鹽水5ml,配成2800單位/ml。取50~100μl濕潤管壁,可抗凝人血3~5ml,血液不會凝固。老鼠血易凝固,所以最好更濃一些??梢匀?.1克肝素凍干粉,加3ml生理鹽水溶解后,取50~100μl,可抗凝鼠血2~4ml。
肝素抗凝管的制備:取0.1克肝素凍干粉,加2.5ml生理鹽水。取100μl~150μl滴入塑料或玻璃管中,濕潤管壁,低于80℃小烤箱中(可以用烤面包的小烤箱),橫向轉(zhuǎn)動,每隔5~10分鐘轉(zhuǎn)動一次,直至干燥后放入4℃保存,可使2~5ml血液不凝固。
二、血液樣本的收集:
全血根據(jù)收集的條件,分成不抗凝和抗凝兩種。同時,不抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血清;抗凝分離出的上層黃色的液體我們稱之為血漿。
1、不抗凝收集血清:將收集好的全血,靜置1~2小時,直接低速離心分離出血清待用或保存。
2、抗凝收集血漿: 收集抗凝全血,輕輕顛倒充分抗凝后,可直接低速離心分離血漿(也可靜置半小時左右再低速離心分離血漿)待用或保存。根據(jù)不同抗凝劑的性能特征,選擇合適的抗凝劑。實(shí)驗(yàn)室常用的抗凝劑有肝素的各種鹽。
選擇抗凝的注意點(diǎn):
①、每一份樣本所加的抗凝劑的量要一致,同時所取的全血的量也要盡量一致;
②、收集抗凝全血后一定要輕輕顛倒,充分抗凝,防止部分血液未接觸到抗凝劑而導(dǎo)致凝固;
③、抗凝全血收集的血漿相對較多(1ml抗凝全血能分離出0.4~0.5ml血漿);
④、抗凝收集的血漿冷凍保存后,解凍時可能會出現(xiàn)絮狀渾濁,如有則需要離心去掉渾濁后
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