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免疫熒光技術(shù)的實驗步驟:
一、準備好試劑與儀器:
磷酸鹽緩沖鹽水、熒光標記的抗體溶液、緩沖甘油、搪瓷桶三只、有蓋搪瓷盒一只、熒光顯微鏡、玻片架、濾紙、37℃溫箱等。
二、實驗步驟
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待檢標本片上,十分鐘后棄去,使標本保持一定濕度。
2.滴加適當稀釋的熒光標記的抗體溶液,使其*覆蓋標本,置于有蓋搪瓷盒內(nèi),保溫一定時間以三十分鐘為參考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS沖洗后,再按順序過0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分鐘,并不停地搖晃振蕩。
4.取出玻片,用濾紙吸去多余水分,但不使標本干燥,加一滴緩沖甘油,以蓋玻片覆蓋。
5.立即用熒光顯微鏡觀察。觀察標本的特異性熒光強度。
詳細介紹:
產(chǎn)品名稱 | 殺菌肽B/天蠶抗菌肽B抗體 |
英文名稱 | Cecropin B |
貨號 | BJ-K8360 |
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抗體的制備過程:
1. 免疫原的制備
普通的大分子蛋白,通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進行誘導表達獲得重組蛋白,純化鑒定后可直接作為免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶聯(lián)載體對該分子進行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原,常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物
常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等,大量生產(chǎn)時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血,家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血,家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定得到的抗血清需要進一步的純化,利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進行層析,具有高效,特異性強,純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。5. 免疫血清的保存建議將抗體分裝后進行保存??贵w一般比較穩(wěn)定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價,而真空干燥保存時間可以更久。產(chǎn)品僅用于科研保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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抗體的生活習性:
(1)結(jié)合特異性抗原:抗體與其他免疫球蛋白分子區(qū)別,就在于抗體能與相應抗原發(fā)生特異性結(jié)合,在體內(nèi)導致生理或病理效應;在體外產(chǎn)生各種直接或間接的可見的抗原抗體結(jié)合反應??贵w是靠其分子上的特殊的結(jié)合部位與抗原結(jié)合的。
(2)激活補體:抗體與相應抗原結(jié)合后,借助暴露的補體結(jié)合點去激活補體系統(tǒng)、激發(fā)補體的溶菌、溶細胞等免疫作用。
(3)結(jié)合細胞:不同類別的免疫球蛋白,可結(jié)合不同種的細胞,產(chǎn)生不同的疚,參與免疫應答。
(4)可通過胎盤及粘膜:免疫球蛋白G(IgG)能通過胎盤進入胎兒血流中,使胎兒形成自然被動免疫。免疫球蛋白A(IgA)可通過消化道及呼吸道粘膜,是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。
(5)產(chǎn)品僅用于科研具有抗原性:抗體分子是一種蛋白質(zhì),也具有刺激機體產(chǎn)生免疫應答的性能。不同的免疫球蛋白分子,各具有不同的抗原性。
(6)抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同:不耐熱,60~70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì),均能破壞抗體的作用。抗體可被中性鹽類沉淀。在生產(chǎn)上??捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白,再經(jīng)透析法將其純化。
Cdc2/CDK1 周期素依賴激酶1依立雄胺(愛普列特)2-溴-5-氯甲Human Ang-II (Angiotensin II) 檢測試劑盒
Phospho-cdc2 (Thr14) 磷酸化周期素依賴激酶2羥磺酸鈣2-溴-5-氯甲Human Ang-I (Angiotensin I) 檢測試劑盒
Phospho-cdc2 (Tyr15) 磷酸化周期素依賴激酶2尼索地平2-溴甲基烯酸乙酯Human ANG II R1/AGTR1 (Angiotensin II Receptor 1) 檢測試劑盒
Phospho-cdc2 (Thr161) 磷酸化周期素依賴激酶2泮托拉唑鈉2-溴甲基烯酸乙酯Human ANG II R1-Ab (Angiotensin II Receptor 1 Aibody) 檢測試劑盒
cdc25A 細胞分裂周期蛋白25六氟鈦酸Human ANG II R2/AGTR2 (Angiotensin II Receptor 2) 檢測試劑盒
Phospho-cdc25A (Thr506) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25聚乙烯Amiloride HCl dihydrateHuman ANGPT4 (Angiopoietin 4) 檢測試劑盒
Phospho-cdc25A (Ser76) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25馬來酸曲美布汀(S,S)-2,6-雙(4-基-2-惡唑啉-2-基)吡啶Human ANGPTL1 (Angiopoietin Like Protein 1) 檢測試劑盒
Phospho-cdc25A (Ser178) 磷酸化細胞分裂周期蛋白25西吡氯銨1-丁基-3-甲基咪唑四氟酸鹽Human ANGPTL2 (Angiopoietin Like Protein 2) 檢測試劑盒
20號染色體開放閱讀框62三-O-乙酰-D-半乳糖烯Porcine ST2 (Syenin 2) 檢測試劑盒
凋亡抑制因子12-甲基琥珀酸酐Porcine TSP-4 (Thrombospondin-4) 檢測試劑盒
20號染色體開放閱讀框272-甲基琥珀酸酐Porcine α-Glu (Alpha Glucosidase) 檢測試劑盒
酯酶抑制蛋白C1IN2-甲基琥珀酸酐Porcine GSTθ1/GSTt1 (Glutathione S Transferase Theta 1) 檢測試劑盒
細胞色素P450 2W11,10-二溴癸烷Porcine NFRκB (Nuclear Factor Related To Kappa B Binding Protein) 檢測試劑盒
膽堿脫氫酶1,10-二溴癸烷Porcine VEGF (Vascular Endothelial Cell Growth Factor ) 檢測試劑盒
細胞因子誘導凋亡抑制因子11,10-二溴癸烷Porcine PGA (Pepsinogen A ) 檢測試劑盒
親環(huán)蛋白PPIB氘代對二甲-d10Porcine GM-CSF Ab (Ai-Granulocyte Macrophage Colony Stimulating Factor Aibody) 檢測試劑盒
殺菌肽B/天蠶抗菌肽B抗體植物乳桿植物亞種Rat ADAMTS13/VWFCP (Von Willebrand Factor Cleaving Protease) Kit
小平菇(秀珍菇)Rat VWF (Von Willebrand Factor) Kit
小單孢Rat XIAP (X-Linked Inhibitor Of Apoptosis Protein) Kit
橢園釀酒酵母Rat α1-AGP (α1-Acid Glycoprotein) Kit
熱帶假絲酵母Rat α1-MG (α1-Microglobulin) Kit
鴨疫里氏桿Rat α-Glu (Alpha Glucosidase) Kit
松針散斑殼Rat β2-GP1 IgA/G/M(β2-Glycoprotein 1 Aibody IgA/G/M) Kit
根瘤Rat BMG/β2-MG (Beta-2-Microglobulin) Kit
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