Bcl-2 試劑盒

該試劑盒以 HRP 標(biāo)記的鏈霉親和素復(fù)合物（HRP Streptavidin Conjugate，
HRP-SA）為基礎(chǔ)，可用于檢測(cè)細(xì)胞、組織內(nèi)的特異性 B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)
抗原。該試劑盒具有靈敏度高、特異性強(qiáng)、定性定位準(zhǔn)確、背景清晰。在所用的
B 細(xì)胞淋巴瘤因子 2(Bcl-2)一抗與相應(yīng)靶抗原結(jié)合后，用生物化二抗與一抗特異
性結(jié)合，后加入 HRP-SA，形成抗原—特異一抗—生物素化二抗—HRP-SA 復(fù)合
物，顯微鏡下觀察成像。 石蠟包埋組織切片免疫染色

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）： 
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達(dá)到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進(jìn)入第 5 步封閉。 
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過(guò)夜； 
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min； 
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min； 
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）； 
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色； 
15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明； 

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片； 
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。 

試劑盒所含試劑： 

試劑 A 通透液：0.1% Triton-X 100   10 mL（選用） 
試劑 B 2 瓶封閉緩沖液（封閉用） 10ml/瓶 
試劑 C （*分裝）已稀釋的即用型 bcl-2 一抗（2.5ml） 
試劑 D （*分裝）生物素化羊抗兔 IgG 1 支 
（濃度 1.5 mg/mL，稀釋比為 1:300~1:500）50 μL+抗體稀釋液 20ml 
試劑 E  HRP-SA 復(fù)合物 1 支（濃度 1 μM，稀釋比 1:50~1:200）100 μL 
試劑 F  DAB 顯色液 5ml 
用戶自備試劑： 
1． 10mM TBS（pH7.2~7.4） 
三羥基氨基甲烷 1.21g 
 

加蒸餾水 800mL，濃鹽酸調(diào) pH 值至 7.2~7.4，后定容至 1000mL 
TBS-T：TBS+Tween 20（0.05%體積比） 
2．抗原修復(fù)液（依檢測(cè)抗原不同而選擇不同的修復(fù)液） 
10mM pH6.0 檸檬酸緩沖液 
檸檬酸 0.38g 
檸檬酸三鈉 2.45g 
加蒸餾水 900mL，濃鹽酸調(diào) pH 值至 6.0，后定容至 1000mL 
或：0.5M EDTA 修復(fù)液（pH8.0） 
EDTA·2H2O 186.1g 
檸檬酸三鈉 2.45g 
加蒸餾水 700mL，用 10mM NaOH 調(diào) pH 值至 8.0，后定容至 1000Ml 
3. 緩沖甘油封固劑 10 mL 
4. Tween 20 5 mL 

石蠟包埋組織切片免疫染色

實(shí)驗(yàn)步驟（建議方案）： 
石蠟包埋組織切片 3~4μm 厚度 
1.烤片： 將待做切片置于切片架上，于 60℃恒溫烤箱中至少烤 1 hr； 
2.脫蠟： 切片放入盛有二甲苯的容器中脫蠟 3 次（即二甲苯Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ），每次
10 min； 
3.水化： 切片經(jīng)下行酒精水化，無(wú)水乙醇 5min，95%乙醇 2 次（每次 2min），85%
乙醇 2 min；75%乙醇 2min，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗 2×2min； 
4.抗原修復(fù)： 根據(jù)抗體說(shuō)明書推薦方法進(jìn)行抗原修復(fù)，常采用高壓、微波（溫
度達(dá)到 98~100℃）或酶消化修復(fù)法，室溫自然冷卻，自來(lái)水沖洗，ddH2O 洗 2×
2min，TBS 洗滌（2×2min）（具體修復(fù)方法見附 1）* 注：有些抗原勿需修復(fù)，
直接進(jìn)入第 5 步封閉。 
5.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 30 min； 
6.加一抗：滴加用試劑 C（即用型一抗），37℃濕盒孵育 2 hr 或 4℃過(guò)夜； 
7.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
8.封閉： 滴加試劑 B，37℃濕盒孵育 10 min； 
9.加二抗： 滴加用抗體稀釋液稀釋的生物素化二抗（試劑 D），37℃濕盒中孵育
30 min； 
10.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min）； 
11.封閉： 滴加試劑 Tween 20，37℃濕盒孵育封閉 20 min； 
12.加 HRP-SA： 滴加用試劑 C 稀釋的試劑 E（1：50~200，終濃度 5~20 nM），37
℃濕盒中孵育 30 min； 
13.洗滌： TBS-T 洗滌（3×5 min），TBS 洗滌（2×5 min）； 
14.顯色：應(yīng)用 DAB 溶液（試劑 F）顯色； 
15.復(fù)染：自來(lái)水充分沖洗，復(fù)染，脫水，透明； 

16.封片： 待組織標(biāo)本干后，用試劑緩沖甘油封固劑封片； 
17.觀察成像： 顯微鏡下觀察成像。 
注意事項(xiàng)： 
1. 修復(fù)后緩沖液須自然冷卻，自來(lái)水沖洗后方能把切片取出，驟冷有可能導(dǎo)致
結(jié)晶或抗原封閉。 
2. 緩沖液的量必須保證所有切片都能浸泡到，用過(guò)的檸檬酸緩沖液不能反復(fù)使
用。 
3. 若試劑為微量濃縮液，用前應(yīng)低速離心，將內(nèi)蓋和管壁附著的溶液離到底部。 
4. 封片前一定要換用 TBS 充分洗滌，以便洗去組織上殘留的 Tween 20，否則會(huì)
影響結(jié)果觀察。 
5. 如須復(fù)染細(xì)胞核，則在封片前復(fù)染或直接采用含有染核試劑的封片劑進(jìn)行封
片。