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elisa分析檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中如此重要

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elisa分析檢測(cè)試劑盒實(shí)驗(yàn)操作中如此重要
1. 間接法測(cè)抗體
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(二抗)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的
受檢抗體,故稱為間接法。操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原,洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的樣本,保溫反應(yīng)。樣本中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。
經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,樣本中的其他成份在洗滌過程中被洗去。
3)加酶標(biāo)抗抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后
,固相載體上的酶量與樣本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4)加底物顯色。
2.競(jìng)爭法測(cè)抗原
小分子抗原或半抗原因缺乏可作夾心法的兩個(gè)以上的位點(diǎn),因此不能用雙抗體夾心法進(jìn)行測(cè)定
,可以采用競(jìng)爭法模式。其原理是標(biāo)本中的抗原和一定量的酶標(biāo)抗原競(jìng)爭與固相抗體結(jié)合。標(biāo)
本中抗原量含量愈多,結(jié)合在固相上的酶標(biāo)抗原愈少,zui后的顯色也愈淺。小分子激素、藥物
等ELISA測(cè)定多用此法。
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