細(xì)胞培養(yǎng)過程中，考慮到細(xì)胞株傳代次數(shù)逐漸增加后，細(xì)胞變異的可能性將增大，繼續(xù)培養(yǎng)的話細(xì)胞株可能會出現(xiàn)老化、狀態(tài)下降、丟失一些該細(xì)胞的特性的現(xiàn)象，對后續(xù)實驗造成影響；

此外，如果該細(xì)胞株特別珍貴，屬于實驗室重要資源，對細(xì)胞進(jìn)行大規(guī)模的保存，能有效降低課題項目執(zhí)行的風(fēng)險;

最后，就是常見的風(fēng)險規(guī)避問題，正所謂人有失手、馬有失蹄，再熟練的實驗操作者、再厲害的實驗設(shè)備也是有出問題的可能，一旦出問題，意味著細(xì)胞資源的損失。

基于以上幾點，細(xì)胞凍存對于一個實驗室或個人來說，是非常必要的操作。

細(xì)胞凍存的注意事項：

1 在凍存之前，確保細(xì)胞狀態(tài)良好。包括：細(xì)胞生長密度符合上述規(guī)定、細(xì)胞無污染、細(xì)胞形態(tài)良好沒有變異。

2 DMSO可以溶解部分濾膜，如果要進(jìn)行過濾，應(yīng)該選擇不會被DMSO降解的濾器，并且操作時務(wù)必帶手套。

3 凍存管的管蓋并不是擰得越緊越好，因為管蓋內(nèi)有O型橡膠圈，擰得太緊會讓其變形，造成泄漏。當(dāng)然，太松也會泄漏。

4 細(xì)胞凍存的密度應(yīng)該要比傳代時的密度要高得多，假如傳代時的密度是1X10^?5/mL，那么凍存時可以將密度提高到100倍。

等到了復(fù)蘇后，再將密度稀釋為1/20也依然能保持較高的生長密度，但與此同時，殘留的DMSO對細(xì)胞的影響則會大大降低。

5 凍存應(yīng)遵循慢凍，復(fù)蘇則相反，應(yīng)快速升溫。慢凍的原因是為了避免降溫時，細(xì)胞內(nèi)的水分還未來得及脫離細(xì)胞，但卻形成冰晶，對細(xì)胞造成損傷。

但也要注意，慢凍不等于無限制的緩慢降溫，因為太慢，也會促成水分形成冰晶。理想的降溫速度應(yīng)該是1度/分鐘的下降速度。