逆轉(zhuǎn)錄后的 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想分析

時(shí)間：2022/8/8閱讀：483

逆轉(zhuǎn)錄后的 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想分析，比如Ct 值偏大或者普通 PCR 產(chǎn)量低原因分析：

1、 RNA 模板質(zhì)量差，需要重新制備 RNA 模板，可通過瓊脂糖凝膠電泳檢測(cè)質(zhì)量。

2、逆轉(zhuǎn)錄后的 cDNA 中含有高濃度的模板 RNA 和逆轉(zhuǎn)錄試劑成分，可能會(huì)對(duì)后續(xù)的PCR 產(chǎn)生抑制作用，所以可以適當(dāng)梯度提高 cDNA 稀釋比例（通常來說可將 cDNA 原液稀釋5-10倍，其最佳模板加入量以擴(kuò)增得到的 Ct 值在20-30個(gè)循環(huán)為好）。

3、起始的 RNA 模板量低，需要減少稀釋倍數(shù)或增加 RNA 模板量。

4、基因本身原因（復(fù)雜和長(zhǎng)度），可以重新設(shè)計(jì)復(fù)雜基因的引物，避免復(fù)雜結(jié)構(gòu)?；蛘哂萌椒ǔ绦蚧蜓娱L(zhǎng)兩步法程序的延伸時(shí)間。

5、逆轉(zhuǎn)錄或者定量產(chǎn)品性能差，可以通過做平行不用品牌產(chǎn)品對(duì)比實(shí)驗(yàn)，對(duì)比逆轉(zhuǎn)錄產(chǎn)品性能。

国产精品成人网站,精品人妻互换一区二区三区,大肉大捧一进一出视频免费的试看,婷婷激情综合网

逆轉(zhuǎn)錄后的 qPCR 實(shí)驗(yàn)結(jié)果不理想分析

會(huì)員登錄

收藏該商鋪

提示