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單克隆抗體制備的基本過程如下:
1、用抗原免疫小鼠;
2、從抗原免疫過的小鼠獲取脾細胞;
3、應(yīng)用細胞雜交技術(shù)使骨髓瘤細胞與B淋巴細胞融合,得到雜交瘤細胞。這種細胞不僅能夠像B淋巴細胞一樣合成性質(zhì)穩(wěn)定的轉(zhuǎn)移性抗體,而且能夠像骨髓瘤細胞一樣無限復(fù)制,這樣就可以產(chǎn)生大量且性質(zhì)專一的鼠源抗體;
4、對獲得的雜交瘤細胞進行篩選,選出能分泌高效價抗體的雜交瘤;
5、對已篩選出的單個細胞進行鑒定和克隆。
雜交瘤產(chǎn)生的單克隆抗體在各個領(lǐng)域中應(yīng)用越來越廣,有很大的優(yōu)點和潛力。能夠根據(jù)需要進行研發(fā)生產(chǎn),可建立穩(wěn)定的細胞株持續(xù)供給應(yīng)用,相比于抗血清能夠減少大量的動物和費用,而且純度高,均一性好,可作為一種標(biāo)準(zhǔn)試劑。
在獲得能分泌高效價抗體的雜交瘤細胞株后,一般有兩種方法來獲得單克隆抗體:小鼠腹腔注射雜交瘤細胞和細胞培養(yǎng)。
1)、小鼠腹水:
將雜交瘤細胞接種到小鼠的腹腔,雜交瘤在腹腔內(nèi)增殖,取得腹水進行純化即可得到抗體。此法易于操作,重復(fù)性高,且花費少,得到的抗體量多,但傷害動物,而且當(dāng)需要大規(guī)模制備抗體時需要大量動物。
2)、細胞培養(yǎng):
將雜交瘤細胞進行培養(yǎng),培養(yǎng)后的上清液中即含有抗體。這種方法適合大規(guī)模生產(chǎn)抗體。但是這種方法獲得的抗體雜質(zhì)相對較多,因為細胞上清含有培養(yǎng)液,pH指示劑,細胞代謝廢物等。而且培養(yǎng)用的血清中的成分不明確,可能會含有能影響抗體純度的雜蛋白。所以在細胞培養(yǎng)中會逐漸將雜交瘤細胞通過逐步減少血清來馴化到無血清培養(yǎng)。
總之,單克隆抗體的高特異性,重復(fù)性使其在生物研究以及醫(yī)藥方向都有良好的應(yīng)用基礎(chǔ)以及前景。
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