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當(dāng)前位置:上海邦景實(shí)業(yè)有限公司>>技術(shù)文章>>RNA提取注意事項(xiàng)
樣品的采集和保存:
以RNA提取為目的的樣品,在采樣時(shí)就要根據(jù)RNA提取的實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行分裝,在RNAlater中保存 (推薦QIAGEN生產(chǎn)的),4℃運(yùn)輸并過(guò)夜,以保證RNAlater充分與樣品細(xì)胞結(jié)合,從而完成RNA的固定,之后轉(zhuǎn)入-20℃保存,如需長(zhǎng)期保存 (幾個(gè)月以上),應(yīng)當(dāng)在-80℃下保存。
提取過(guò)程中的注意事項(xiàng):
1. 所有實(shí)驗(yàn)所用的槍頭、離心管等消耗品均要使用RNase-free的;
2.整個(gè)過(guò)程要在無(wú)RNase污染的條件下進(jìn)行,通??梢栽跓o(wú)菌操作臺(tái)中進(jìn)行實(shí)驗(yàn),并用75%的酒精進(jìn)行擦拭殺菌,如有必要也可在實(shí)驗(yàn)前噴灑一些商用的RNase抑制劑;
3.所有相關(guān)溶液的配制要使用RNase-free水或DEPC水 (包括75%酒精也需要用無(wú)水乙醇與DEPC水配制);
4.溶液的配制使用移液器進(jìn)行操作,切勿使用量筒等中間器皿;
研5.缽、研棒、鑷子、剪刀等用錫箔紙包好后,200℃干熱滅菌4h;
6. 實(shí)驗(yàn)過(guò)程中一定要戴手套和口罩;
7.異丙醇、、乙醇等試劑要使用未開(kāi)封的,或者開(kāi)封之后直接分裝至小容量離心管的,以避免多次使用的交叉污染;
注1:現(xiàn)在一般實(shí)驗(yàn)室都使用從公司直接購(gòu)買(mǎi)的RNase-free水,這種水通常都是大包裝,比如100mL一瓶,在第一次使用的時(shí)候,開(kāi)蓋后一定要將其分裝到1.5或2mL RNase-free離心管中,在冰箱中保存,每次實(shí)驗(yàn)用多少取多少,避免多次實(shí)驗(yàn)的交叉污染。
注2:一定要戴口罩?。?!不要怕麻煩,因?yàn)槟阏鏇](méi)法保證實(shí)驗(yàn)過(guò)程中不打噴嚏?。?!
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