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細(xì)胞傳代的操作過(guò)程

時(shí)間:2020/4/26閱讀:209
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1、選擇細(xì)胞:鏡檢細(xì)胞,選擇成長(zhǎng)狀態(tài)杰出,細(xì)胞界限明晰,具有立體感,形態(tài)好無(wú)污染、無(wú)異常及可疑病變細(xì)胞。

2、配制細(xì)胞培養(yǎng)液:按以下配比配制MEM-0.2%LH 培養(yǎng)液100ml 內(nèi),加入滅活小牛血清10m1,慶大霉素溶液0.3m1,7.5%碳酸氫鈉溶液3ml。(僅供一般參考)。

3、消化細(xì)胞:先用PBS 洗液沖洗細(xì)胞外表1-2 次,每次10m1,棄去洗液,向細(xì)胞瓶?jī)?nèi)加入0.25%胰蛋白酶溶液,每瓶1m1,細(xì)胞瓶平放,使消化液*覆蓋細(xì)胞外表。

4、至細(xì)胞*脫落到胰酶中:每瓶加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液吹打渙散細(xì)胞,按所需的傳代比例分裝于小方瓶(100m1)中,再加入10m1 細(xì)胞培養(yǎng)液重復(fù)吹打一次后分裝,然后補(bǔ)加至所需培養(yǎng)量。

5、加塞,置于37±1℃孵箱培養(yǎng)。約2~4 天成片(由細(xì)胞接種濃度決定)。

6、填寫(xiě)傳代記載。

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