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ELISA試劑盒是免疫診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動化操作等特點(diǎn)。
elisa分析檢測試劑盒操作步驟
1.首先將抗人IgMbt鏈抗體于碳酸鹽緩沖液中40c下過夜包被聚苯乙烯等固相,形成固相抗體,洗滌去除未與固相結(jié)合或結(jié)合不緊的抗體后,用小牛血清或牛血清白蛋白等封閉,洗滌去除未結(jié)合的部分及雜質(zhì)。
2.加入含待測IgM抗體的臨床樣本如血清等,溫育一定時間后洗板;此時,大鼠ELISA試劑盒待測樣本中的IgM抗體就會與固相上的抗P鏈抗體反應(yīng)而吸附于固相上。
3.加入特異的抗原如HAV抗原、HBcAg等,溫育一定時間后洗板;此時,特異抗原就會與固相上的特異IgM抗體發(fā)生反應(yīng)。
4.加入酶標(biāo)記的抗特異抗原的抗體,溫育一定時間后洗板;此時,在固相上即形成相應(yīng)的抗原抗體復(fù)合物。
因此,如不對血清樣本稀釋,就直接檢測,即使是沒有非特異IgM的干擾,陽性測定結(jié)果也沒有急染的診斷價值。現(xiàn)在,有些試劑生產(chǎn)廠家,為了迎合臨床實(shí)驗(yàn)室減輕勞動強(qiáng)度、大鼠ELISA試劑盒簡便操作的要求,生產(chǎn)了不需對樣本進(jìn)行稀釋的抗HAVIgM和抗HBclgMELISA試劑盒,現(xiàn)有不少實(shí)驗(yàn)室也在使用。鑒于上面提到的原因,我們建議臨床實(shí)驗(yàn)室在做抗HAVIgM和抗HBc lgM等類檢測時,應(yīng)使用對樣本進(jìn)行稀釋的試劑盒,以保證檢測的臨床價值。
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