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elisa定量試劑盒實驗步驟

時間:2018/6/27閱讀:210
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elisa定量試劑盒實驗步驟
1.貧血顯著約70%的患者Hb<6Og/L外周可見幼紅細胞.
2,白細胞數中度升高以10-50×109/L多見
3. 血片中以原粒細胞為主,可占30-6O%,有時高達90%以上,可見畸形原始粒細胞,但少數非白血病患者極少或無幼稚粒細胞出現,小原粒細胞(胞體小與淋巴細胞相似,胞核圓形染色質呈細顆粒狀,較正常原粒細胞密集,核仁1-2個)
4. 血小板有中度到重度減少,半數病例在50×109/L以下.
制備操作步驟
(1) 從新活化的E.coli DH5α菌平板上挑取一單菌落,接種于3~5ml LB液體培養(yǎng)中,37℃振蕩培養(yǎng)12h左右,直至對數生長期。將該菌懸液以1:100~1:50轉接于100ml LB液體培養(yǎng)基中,37℃振蕩擴大培養(yǎng),當培養(yǎng)液開始出現混濁后,每隔20~30min測一次OD600nm,至OD600nm≤0.5時停止培養(yǎng);
(2) 每組取培養(yǎng)液3個2ml轉入2ml離心管中,在冰上冷卻20-30min,于4℃,4000r/min離心10min(從這一步開始,所有操作均在冰上進行,速度盡量快而穩(wěn));
 (3) 倒凈上清培養(yǎng)液,用1ml冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液輕輕懸浮細胞,冰浴;
(4) 0~4℃,4000r/min離心10min;
 (5) 棄去上清液,加入500µll冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液,小心懸浮細胞。0~4℃,4000r/min離心10min;
(6) 棄去上清液,加入100µl冰冷的0.1mo1/L CaCl2溶液,小心懸浮細胞,冰上放置片刻后,即制成了感受態(tài)細胞懸液;
(7) 制備好的感受態(tài)細胞懸液可直接用于轉化實驗,也可加入占總體積15%左右高壓滅菌過的甘油,混勻后分裝于1.5ml離心管中,置于-70℃條件下,可保存半年至一年。
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