進(jìn)口elisa試劑盒實(shí)驗(yàn)的操作要點(diǎn)
1、標(biāo)本的采取和保存
可用作ELISA測(cè)定的標(biāo)本十分廣泛，體液（如血清）、分泌物（唾液）和排泄物（如尿液、糞便）等均可作標(biāo)本以測(cè)定其中某種抗體或抗原成份。有些標(biāo)本可直接進(jìn)行測(cè)定（如血清、尿液），有些則需經(jīng)預(yù)處理（如糞便和某些分泌物）。大部分ELISA檢測(cè)均以血清為標(biāo)本。血漿中除尚含有纖維蛋白原和抗凝劑外，其他成份均同等于血清。制備血漿標(biāo)本需借助于抗凝劑，而血清標(biāo)本只要待血清自然凝固、收縮后即可取得。除特殊情況外，在醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)中均以血清作為檢測(cè)標(biāo)本。在ELISA中血漿和血清可同等應(yīng)用。血清標(biāo)本可按常規(guī)方法采集，應(yīng)注意避免溶血，紅細(xì)胞溶解時(shí)會(huì)釋放出具有過氧化物酶活性的物質(zhì)，以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中，溶血標(biāo)本可能會(huì)增加非特異性顯色。
血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè)。如有細(xì)菌污染，菌體中可能含有內(nèi)源性HRP，也會(huì)產(chǎn)生假陽性反應(yīng)。如在冰箱中保存過久，其中的可發(fā)生聚合，在間接法ELISA中可使本底加深。一般說來，在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃，超過一周測(cè)定的需低溫冰存。凍結(jié)血清融解后，蛋白質(zhì)局部濃縮，分布不均，應(yīng)充分混勻宜輕緩，避免氣泡，可上下顛倒混和，不要在混勻器上強(qiáng)烈振蕩?；鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾，澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落，所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè)，宜少量分裝冰存。保存血清自采集時(shí)就應(yīng)注意無菌操作，也可加入適當(dāng)防腐劑。
2、豬ELISA試劑盒試劑的準(zhǔn)備
按Elisa試劑盒說明書的要求準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)中需用的試劑。ELISA中用的蒸餾水或去離子水，包括用于洗滌的，應(yīng)為新鮮的和高質(zhì)量的。自配的緩沖液應(yīng)用pH計(jì)測(cè)量較正。從冰箱中取出的試驗(yàn)用試劑應(yīng)待溫度與室溫平衡后使用。試劑盒中本次試驗(yàn)不需用的部分應(yīng)及時(shí)放回冰箱保存。
 3、加樣
在ELISA中一般有3次加樣步聚，即加標(biāo)本，加酶結(jié)合物，加底物。加樣時(shí)應(yīng)將所加物加在LEISA板孔的底部，避免加在孔壁上部，并注意不可濺出，不可產(chǎn)生氣泡。 加標(biāo)本一般用微量加樣器，按規(guī)定的量加入板孔中。每次加標(biāo)本應(yīng)更換吸嘴，以免發(fā)生交叉污染，也可用一次性的定量塑料管加樣。有此測(cè)定（如間接法ELISA）需用稀釋的血清，可在試管中按規(guī)定的稀釋度稀釋后再加樣。也可在板孔中加入稀釋液，再在其中加入血清標(biāo)本，然后在微型震蕩器上震蕩1分鐘以保證混和。加酶結(jié)合物應(yīng)用液和底物應(yīng)用液時(shí)可用定量多道加液器，使加液過程迅速完成。
 4、保溫
在ELISA中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶結(jié)合物后?？乖贵w反應(yīng)的完成需要有一定的溫度和時(shí)間，這一保溫過程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA中似不恰當(dāng)。
ELISA屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的結(jié)合只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，加入板孔中的標(biāo)本，其中的抗原并不是都有均等的和固相抗結(jié)合的機(jī)會(huì)，只有zui貼近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。這是一個(gè)逐步平衡的過程，因此需經(jīng)擴(kuò)散才能達(dá)到反應(yīng)的終點(diǎn)。在其后加入的酶標(biāo)記抗體與固相抗原的結(jié)合也同樣如此。這就是為什么ELISA反應(yīng)總是需要一定時(shí)間的溫育。
溫育常采用的溫度有43℃、37℃、室溫和4℃（冰箱溫度）等。37℃是實(shí)驗(yàn)室中常用的保溫溫度，也是大多數(shù)抗原抗體結(jié)合的合適溫度。在建立ELISA方法作反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究時(shí)，實(shí)驗(yàn)表明，兩次抗原抗體反應(yīng)一般在37℃經(jīng)1-2小時(shí)，產(chǎn)物的生成可達(dá)。為加速反應(yīng)，可提高反應(yīng)的溫度，有些試驗(yàn)在43℃進(jìn)行，但不宜采用更高的溫度?？乖贵w反應(yīng)4℃更為*，在放射免疫測(cè)定中多使反應(yīng)在冰箱中，以形成zui多的沉淀。但因所需時(shí)間太長(zhǎng)，在ELISA中一般不予采用。
進(jìn)口elisa試劑盒前腦啡肽(PENK)ELISA試劑盒    ，英文名：    PENK ELISA Kit
前列腺轉(zhuǎn)谷氨酰胺酶(TGM4)ELISA試劑盒    ，英文名：    TGM4 ELISA Kit
前列腺抑制肽(PIP)ELISA試劑盒    ，英文名：    PIP ELISA Kit
前列腺酸性磷酸酶(ACP3)ELISA試劑盒    ，英文名：    ACP3 ELISA Kit
前列腺素還原酶2(PTGR2)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGR2 ELISA Kit
前列腺素還原酶1(PTGR1)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGR1 ELISA Kit
前列腺素I合酶(PTGIS)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGIS ELISA Kit
前列腺素F受體(FP)ELISA試劑盒    ，英文名：    FP ELISA Kit
前列腺素E受體3(EP3)ELISA試劑盒    ，英文名：    EP3 ELISA Kit
前列腺素E受體2(EP2)ELISA試劑盒    ，英文名：    EP2 ELISA Kit
前列腺素E合酶2(PTGES2)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGES2 ELISA Kit
前列腺素E合酶(PTGES)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGES ELISA Kit
前列腺素D合酶(PTGDS)ELISA試劑盒    ，英文名：    PTGDS ELISA Kit
前列腺素D2合成酶(PGD2S)ELISA試劑盒    ，英文名：    PGD2S ELISA Kit
前列腺六跨膜表皮抗原2(STEAP2)ELISA試劑盒    ，英文名：    STEAP2 ELISA Kit
前列腺干細(xì)胞抗原(PSCA)ELISA試劑盒    ，英文名：    PSCA ELISA Kit
前列腺凋亡應(yīng)答因子4(PAR4)ELISA試劑盒    ，英文名：    PAR4 ELISA Kit
前列腺蛋白類脂肪酶B(LIPB)ELISA試劑盒    ，英文名：    LIPB ELISA Kit
前膠原賴氨酸-2-酮戊二酸-5-雙加氧酶1(PLOD3)ELISA試劑盒    ，英文名：    PLOD3 ELISA Kit
前膠原C端蛋白酶增強(qiáng)子1(PCPE1)ELISA試劑盒    ，英文名：    PCPE1 ELISA Kit進(jìn)口elisa試劑盒