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人源內(nèi)參基因(GAPDH)熒光PCR法

參  考  價:2990
具體成交價以合同協(xié)議為準(zhǔn)
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    經(jīng)銷商

  • 所在地

    上海市

規(guī)格

50T 2990元 15盒可售

更新時間:2023-11-06 09:28:36瀏覽次數(shù):225次

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產(chǎn)地 國產(chǎn) 加工定制
規(guī)格 50T 貨號 AP4048
檢測范圍 2×103~1×108copies/mL 用途 僅供科研實驗
人源內(nèi)參基因(GAPDH)熒光PCR法低溫運(yùn)輸不能超過 4 天;開封后避光-20℃儲存,對有效期沒有影響。避免反復(fù)凍融,凍融 6 次不影響檢測效果。

人源內(nèi)參基因(GAPDH)熒光PCR法【結(jié)果分析條件設(shè)定】:

u 基線(Baseline)設(shè)定:應(yīng)選擇該次實驗指數(shù)擴(kuò)增前所有樣本熒光信號比較穩(wěn)定的一段區(qū)域(所有樣本熒光信號無較大波動),起始點(diǎn)(Start)應(yīng)避開熒光采集起始階段的信號波動,終止點(diǎn)(End)應(yīng)比最早出現(xiàn)指數(shù)擴(kuò)增的樣本Ct值減少1~3個循環(huán),建議基線設(shè)為6~15。

u 閾值(Threshold)設(shè)定:將閾值線設(shè)定在剛好超過正常陰性質(zhì)控品擴(kuò)增曲線的最高點(diǎn)。

【質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)】:

1.   陰性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陰性,無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct;

2.   陽性質(zhì)控品的檢測結(jié)果應(yīng)為陽性,有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,Ct值應(yīng)小于等于35;

3.   以上要求需在一次實驗中同時滿足,否則該次實驗視為無效。

【結(jié)果判斷】:

1.   陽性:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且Ct<38;

2.可疑:有明顯的指數(shù)擴(kuò)增期,且38≤Ct<40,此時樣本為可疑樣本;對于可疑樣本建議復(fù)核一次,若復(fù)核結(jié)果Ct<40且有指數(shù)擴(kuò)增期,則判定為陽性,否則判定為陰性;

3.   陰性:無指數(shù)擴(kuò)增期,Ct=40或無Ct值均判定為陰性樣本。

【注意事項】:

             1.PCR 操作各階段應(yīng)嚴(yán)格分區(qū)操作,避免交叉污染。

             2.試劑盒各組分使用前應(yīng)充分融化混勻,離心數(shù)秒后使用。

             3.各組分不得與其他產(chǎn)品或不同批號的相應(yīng)成分進(jìn)行互換。

             4.待測標(biāo)本若不及時檢測,應(yīng)保存于-20℃或-70℃。

             5.樣品的處理應(yīng)該嚴(yán)格按照生物安全規(guī)范操作。

             6.PCR 操作人員應(yīng)具有經(jīng)驗和受過專業(yè)培訓(xùn)。

             7.本試劑盒僅用于科研使用,不做為臨床診斷使用。

【儲存條件及有效期】

1.避光-20℃儲存,有效期 12 個月。

2.低溫運(yùn)輸不能超過 4 天;開封后避光-20℃儲存,對有效期沒有影響。避免反復(fù)凍融,凍融 6 次不影響檢測效果。

3.生產(chǎn)日期、有效期至:見外包裝盒。

【適用儀器】

適用于 ABI 7500、Bio-Rad CFX96、Roche480 等全自動熒光PCR 檢測儀。

【樣本要求】

1.樣本種類:鼻/咽拭子、痰液、支氣管肺泡灌洗液;培養(yǎng)物等樣品。

2.保存條件:采集的標(biāo)本應(yīng)及時送檢,24 小時內(nèi)檢測的應(yīng) 4℃保存,超過 24 小時的最好-70℃保存,并避免反復(fù)凍融。

【檢測方法】

1 . 試劑準(zhǔn)備(試劑準(zhǔn)備區(qū))

將試劑盒各組分置 4℃避光融化,充分混勻后瞬間離心。計算試劑使用份數(shù) N(N=樣本數(shù)+1 管陽性對照+1 管陰性對照),根據(jù)下表配置反應(yīng)體系mix,加入一適當(dāng)體積離心管中,充分混勻后瞬間離心,按 20μL 分裝至 PCR 反應(yīng)管/板,并轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。

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