別    名  Listeriolysin; hly; hlyA; lisA; LLO; Thiol activated cytolysin; listeriolysin precursor.

英文名稱  Anti-Listeriolysin

中文名稱  李斯特菌溶胞素抗體

濃    度  1mg/1ml

規(guī) 格  0.2ml/200μg     

抗體來源  Rabbit  

克隆類型  polyclonal

交叉反應(yīng)  Listeria monocytogenes  

產(chǎn)品類型  一抗         ?

抗體制備過程：
1.材料與試劑
  a．提取的動物 Ig
  b．弗氏*佐劑和弗氏不*佐劑
  c．青霉素和鏈霉素
  d．實驗動物 兔
  e．其它材料及試劑
2、選擇實驗活體。
3、進(jìn)行動物免疫實驗。
4、試取血樣進(jìn)行測試，查看免疫效果。
5、如果免疫成功，殺死實驗活體，采集全部血清。
6、純化出抗體。
7、產(chǎn)品僅用于科研鑒定抗體。胎牛血清（無菌采制）
實驗原理 :
（1）特異性結(jié)合抗原：抗體本身不能直接溶解或殺傷帶有特異抗原的靶細(xì)胞，通常需要補(bǔ)體或吞噬細(xì)胞等共同發(fā)揮效應(yīng)以清除病原微生物或?qū)е虏±頁p傷。然而，抗體可通過與病毒或毒素的特異性結(jié)合，直接發(fā)揮中和病毒的作用。 
（2）活補(bǔ)體：IgM、IgG1、IgG2和IgG3可通過經(jīng)典途徑激活補(bǔ)體，凝聚的IgA、IgG4和IgE可通過替代途徑激活補(bǔ)體。 
（3）結(jié)合細(xì)胞：不同類別的免疫球蛋白，可結(jié)合不同種的細(xì)胞，參與免疫應(yīng)答。 
（4）可通過胎盤及粘膜：免疫球蛋白G（IgG）能通過胎盤進(jìn)入胎兒血流中，使胎兒形成自然被動
免疫。免疫球蛋白A（IgA）可通過消化道及呼吸道粘膜，是粘膜局部抗感染免疫的主要因素。 
（5）具有抗原性：抗體分子是一種蛋白質(zhì)，也具有刺機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答的性能。不同的免疫球蛋白分子，各具有不同的抗原性。 
（6）抗體對理化因子的抵抗力與一般球蛋白相同：不耐熱，60～70℃即被破壞。各種酶及能使蛋白質(zhì)凝固變性的物質(zhì)，均能破壞抗體的作用?？贵w可被中性鹽類沉淀。在上?？捎昧蛩徜@或硫酸鈉從免疫血清中沉淀出含有抗體的球蛋白，再經(jīng)透析法將其純化。
?
抗體的鑒定：
1）抗體的效價鑒定：不管是用于診斷還是用于治療,制備抗體的目的都是要求較高效價。不同的抗原制備的抗體,要求的效價不一。鑒定效價的方法很多,包括有試管凝集反應(yīng),瓊脂擴(kuò)散試驗,酶聯(lián)免疫吸附試驗等。常用的抗原所制備的抗體一般都有約成的鑒定效價的方法,以資比較。如制備抗抗體的效價,一般就采用瓊脂擴(kuò)散試驗來鑒定。
2）抗體的特異性鑒定：抗體的特異性是指與相應(yīng)抗原或近似抗原物質(zhì)的識別能力?？贵w的特異性高,它的識別能力就強(qiáng)。衡量特異性通常以交叉反應(yīng)率來表示。交叉反應(yīng)率可用競爭抑制試驗測定。以不同濃度抗原和近似抗原分別做競爭抑制曲線,計算各自的結(jié)合率,求出各自在IC50時的濃度,并按公式計算交叉反應(yīng)率。 
如果所用抗原濃度IC50濃度為pg/管,而一些近似抗原物質(zhì)的IC50濃度幾乎是無窮大時,表示這一抗血清與其他抗原物質(zhì)的交叉反應(yīng)率近似為0,即該血清的特異性較好。
3）抗體親和力：是指抗體和抗原結(jié)合的牢固程度。親和力的高低是由抗原分子的大小,抗體分子的結(jié)合位點與抗原決定簇之間立體構(gòu)型的合適度決定的。有助于維持抗原抗體復(fù)合物穩(wěn)定的分子間力有氫鍵,疏水鍵,側(cè)鏈相反電荷基因的庫侖力,范德華力和空間斥力。親和力常以親和常數(shù)K表示,K的單位是L/mol。抗體親和力的測定對抗體的篩選,確定抗體的用途,驗證抗體的均一性等均有重要意義。
抗體的制備過程：
1. 免疫原：普通的大分子蛋白，通過分子克隆構(gòu)建載體并在大腸桿菌中進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)獲得重組蛋白，純化鑒定后可直接作為免疫原；小分子蛋白或化合物等分子量小，需要偶聯(lián)載體對該分子進(jìn)行改造才能使其成為具有免疫原性的抗原，常見偶聯(lián)載體如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫動物：常用于制備抗血清的動物有豚鼠、家兔、雞、大小鼠等，大量時需要用到狗、綿羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集：一般家兔、綿羊、山羊可采用靜動脈采血，家兔、豚鼠、大鼠、雞可采用心臟采血，家兔、山羊、綿羊可采用靜脈采血。
4. 免疫血清的純化與鑒定：得到的抗血清需要進(jìn)一步的純化，利用偶聯(lián)了抗原的親和柱進(jìn)行層析，具有高效，特異性強(qiáng)，純度高的特定。接著要鑒定純化蛋白的含量、相對分子的質(zhì)量、純度以及特異性。
5. 免疫血清的保存：產(chǎn)品僅用于科研抗體一般比較穩(wěn)定，在-80℃ ～-20 ℃可以保存約5年而不會影響效價，而真空干燥保存時間可以更久。保存前需經(jīng)除菌并添加防腐劑。
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