當前位置:上海撫生實業(yè)有限公司>>感覺態(tài)細胞>>克隆感受態(tài)細胞>> DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝
產(chǎn)地 | 進口 | 加工定制 | 是 |
---|---|---|---|
適用領(lǐng)域 | 科研 |
細胞的種類:
*種:
DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝是凍存產(chǎn)品,由液氮直接拿出,干冰運輸給客戶。一般不推薦這種,也較少使用這種方式,因為復(fù)蘇手法對于細胞狀態(tài)影響較大,一旦細胞狀態(tài)不好,很難說是細胞自身不行,還是復(fù)蘇沒操作好;另外溫度對細胞、基因功能狀態(tài)影響很大,也不是細胞儲存的方式,快遞時間也很難控制,多種因素影響產(chǎn)品的質(zhì)量;干冰運輸需要額外添加400元的運費(順豐)。
第二種:
是我們復(fù)蘇好細胞,QC通過后,T-25灌滿培養(yǎng)基常溫運輸給客戶,排除復(fù)蘇造成影響,常溫運輸也對細胞影響也不大,只需加25元運費(順豐)。
質(zhì)量保證:我們的細胞株來源于ATCC、ECACC、DSMZ、JCRB等,購買到貨后,由我們實驗室擴增、凍存,凍存的產(chǎn)品全部經(jīng)過QC檢測,進口來源,保證5代以內(nèi),活力>95%,無細菌、真菌、支原體污染。的凍存是細胞培養(yǎng)的基本操作,不同的實驗室采用的方法略有差異,但是都會遵循慢凍速溶的宗旨。
產(chǎn)品名稱 | 包裝 | 分類 |
DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝 | 100ul*50 | 克隆感受態(tài)細胞 |
實驗報告:
一、DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝分離與培養(yǎng):
1、無菌條件下,取出1-3d 齡SD大鼠心房組織,然后用PBS將此組織塊清洗2次,后將組織剪成1mm3左右大??;
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液(0.1% 胰酶和0.1% I型膠原酶),混懸10s,置37℃條件下消化10min,之后用滴管吹打制成單細胞懸液,自然沉淀并收集上清,用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置;
3、剩下的組織再加入3~4mL酶消化液,混懸10s,置37℃消化10 min后,按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置,重復(fù)此步驟2-3次,直至組織*被消化;
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液,1200r/min 離心10min,棄去上清,沉淀細胞用含有10% FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸,接種于25cm2培養(yǎng)瓶,放置于37℃ ,5%CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng);
5、差速貼壁1h后,吸出培養(yǎng)基,按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)
二、免疫熒光鑒定:
1、待心房肌細胞生長至80%融合時,棄去培養(yǎng)基,用溫育的PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min;
2、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在4℃條件下,用0.1%Triton X-100透膜15min;
3、PBS沖洗細胞2次,每次10min,然后在室溫條件下,用4% BSA封閉細胞30min;
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗(Abbioscience公司),然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜;
5、PBS沖洗細胞3次,每次10min,按1:150的比例稀釋抗α-actin的二抗(嘉美生物公司), 37℃條件下放置1h;
6、用PBS沖洗3次,每次10min,后在倒置熒光顯微鏡(Leica公司)下觀察圖像并拍照。
細胞培養(yǎng)操作規(guī)程:
一.DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復(fù)蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
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* 纖維粘連蛋白-牛源 英文名稱:BPF
* I 型膠原細胞檢測試劑盒 英文名稱:Col
* 纖維母細胞粘附檢測試劑盒 英文名稱:Fibro
* MTT細胞活力和增殖檢測試劑盒 英文名稱:MTT
* WST-1細胞活力和增殖檢測試劑盒 英文名稱:WST
* 細胞衰老檢測試劑盒 英文名稱:CSA
* β-半乳糖苷酶比色檢測試劑盒 英文名稱:GalC
角膜上皮細胞培養(yǎng)基 CEpiCM-prf
滋養(yǎng)層細胞培養(yǎng)基 TM-prf *
前脂肪細胞培養(yǎng)基 PAM-prf 原裝/進口
前脂肪細胞分化培養(yǎng)基 PADM-prf
人癌細胞,BT-549細胞 *
人癌細胞,BT474細胞 原裝/進口
人癌細胞,HS578T細胞
人癌細胞,MCF-7細胞細胞系 *
DH10Bac 感受態(tài)細胞100ul*50包裝Dermokine蛋白檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Desmuslin蛋白檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Diaphanous同源物1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dicer酶1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白1檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白2檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白3檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
Dickkopf相關(guān)蛋白4檢測試劑盒 規(guī)格: 48T/96T
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