NCI-H854細胞-上海撫生實業(yè)有限公司

貨號	AXB6556	規(guī)格	T25培養(yǎng)瓶
英文名稱	NCI-H854；NCIH854	產(chǎn)品分類	人細胞系

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

細胞傳代：

1. NCI-H854細胞試驗準備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細胞分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養(yǎng)液重懸細胞，細胞計數(shù)后選擇 0.8X106 個細胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。

8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

細胞轉(zhuǎn)染：

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

腫瘤壞死因子誘導蛋白2封閉多肽	TNF-α 小鼠腫瘤壞死因子αELISA檢測試劑盒
脂肪細胞型脂肪suan結(jié)合蛋白封閉多肽+O16373	人糖原合成酶激酶3(GSK-3)ELISA試劑盒
CD7封閉多肽	人中性內(nèi)肽酶/腦啡肽酶(NEP)ELISA試劑盒
C型凝集su結(jié)構(gòu)域家族2成員H封閉多肽	NAP關(guān)聯(lián)蛋白ELISA試劑盒
磷suan化酪蛋白激酶Ⅱβ亞單位封閉多肽	K-乙酰轉(zhuǎn)移酶5ELISA試劑盒
白介su-17B封閉多肽	N-乙酰轉(zhuǎn)移酶2ELISA試劑盒
CTR1封閉多肽	N端中段骨鈣suELISA試劑盒
腫瘤壞死因子受體超家族成員27封閉多肽	Neugrin蛋白ELISA試劑盒
跨膜蛋白SEMA3D封閉多肽	AmAC-1 雞巨噬細胞替代激活相關(guān)化學因子1ELISA檢測試劑盒
環(huán)指蛋白89	原肌球調(diào)節(jié)蛋白4(TMOD4)ELISA試劑盒
c-fos封閉多肽	Jo1抗體/抗組氨酰tRNA合成酶抗體ELISA試劑盒
CD7封閉多肽	NCI-H854細胞孕烯醇酮(PREG)ELISA試劑盒
CRYM蛋白封閉多肽	Ang-Ⅰ 小鼠血管緊張suⅠELISA檢測試劑盒
植物擴張蛋白ATEXPA10（擬南芥）多肽	ANF 人心納suELISA檢測試劑盒
腫瘤壞死因子受體相關(guān)蛋白4封閉多肽	MYC關(guān)聯(lián)因子XELISA試劑盒

細胞培養(yǎng)實驗基本操作：
①進無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細胞，同時塑料細胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細胞懸液時，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細胞遺傳學方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細胞遺傳物發(fā)生改變，可以復蘇早期凍存的細胞使用。