HBE135-E6E7人支氣管上皮細(xì)胞-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號(hào)	A01X725	規(guī)格	1×106
英文名稱	HBE135-E6E7細(xì)胞	產(chǎn)品分類	人細(xì)胞系
實(shí)驗(yàn)類型	角質(zhì)無血清培養(yǎng)基+0.005mg/ml胰島素+500ng/ml氫化的松+1%PS（D-KSFM 推	報(bào)告	提供STR鑒定報(bào)告

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

名稱	HBE135-E6E7 (人支氣管上皮細(xì)胞) (STR鑒定正確)
別稱	HBE 135-E6E7; HBE 135-E6/E7
種屬	人
生長(zhǎng)特性	貼壁細(xì)胞
細(xì)胞形態(tài)	上皮細(xì)胞樣；卵圓形
生長(zhǎng)培養(yǎng)基	KSFM+5 ng/ml rhEGF + 0.05 mg/ml BPE0.05 mg/ml BPE(Bovine Pituitary Extract)+0.005 mg/ml insulin +500 ng/ml hydrocortisone
凍存條件	凍存液：55% 基礎(chǔ)培養(yǎng)基+40% FBS+5% DMSO溫度：液氮
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%溫度：37℃
推薦傳代比例	1:3-1:4
推薦換液頻率	2-3次/周

參考資料(來源文獻(xiàn))

背景描述	The HBE135-E6E7 cell line was derived from normal bronchial epithelium taken from a man undergoing lobectomy for squamous cell carcinoma. Cells from the primary explant in their first passage were infected with the recombinant retrovirus LXSN16E6E7 containing the human papilloma virus (HPV) E6E7 gene. Cells were selected in the presence of 0.4 mg/mL G418
年齡（性別）	男性, 54歲
組織來源	肺；支氣管
細(xì)胞類型	轉(zhuǎn)化細(xì)胞系
生物安全等級(jí)	2
倍增時(shí)間	Approximately 24 to 30 hrs
保藏機(jī)構(gòu)	ATCC; CRL-2741

細(xì)胞傳代：

1. HBE135-E6E7人支氣管上皮細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號(hào)筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個(gè)細(xì)胞加入一個(gè) 35mm 培養(yǎng)皿。

8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個(gè)轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

催乳su調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白PREB封閉多肽	平尾毛細(xì)線蟲PCR檢測(cè)試劑盒
禽白血病病毒F亞群RT-PCR試劑盒	低氧誘導(dǎo)因子2ELISA試劑盒
人α-內(nèi)肽(α-EP)試劑盒 ELISA	彈性蛋白微原纖維界面因子1ELISA試劑盒
人成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4(FGF4)試劑盒ELISA	細(xì)胞周期suI2ELISA試劑盒
人八聚體轉(zhuǎn)錄因子(OTF2A)ELISA檢測(cè)試劑盒	單酰甘油-O-?；D(zhuǎn)移mei1ELISA試劑盒
人非小細(xì)胞肺癌相關(guān)抗原211(CA211)ELISA試劑盒	胞質(zhì)動(dòng)力蛋白ELISA試劑盒
泛su連接meiSiah2	壞死性肝胰腺炎(NHPB)核suan檢測(cè)試劑盒
重組人軟骨蛋白聚糖核心蛋白	茄病鐮刀菌PCR檢測(cè)試劑盒
CD8封閉多肽	豬勞森氏胞內(nèi)菌(LI)核suan檢測(cè)試劑盒
腫瘤壞死因子受體2封閉多肽	紅薯內(nèi)源基因PCR檢測(cè)試劑盒
c-fos封閉多肽	馬皰疹病毒3型PCR試劑盒
多藥耐藥相關(guān)蛋白4封閉多肽	HBE135-E6E7人支氣管上皮細(xì)胞禽肺病毒PCR檢測(cè)試劑盒
聚磷suan肌醇磷suanmei5B封閉多肽	秦皮探針法PCR鑒定試劑盒
卵透明帶糖蛋白2封閉多肽	馬皰疹病毒2型PCR試劑盒
同源盒蛋白HOXD10封閉多肽	馬毛癬菌PCR試劑盒

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動(dòng)作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長(zhǎng)時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會(huì)產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會(huì)將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長(zhǎng)，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會(huì)產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺(tái)面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺(tái)面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲(chǔ)備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。