HCMEC/D3永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞-上海撫生實(shí)業(yè)有限公司

貨號	A01X647	規(guī)格	1×106
英文名稱	A549細(xì)胞	產(chǎn)品分類	人細(xì)胞系
實(shí)驗(yàn)類型	F12K+10%FBS+1%P/S	報(bào)告	提供STR鑒定報(bào)告

公司產(chǎn)品僅供科研研究使用、不得用于臨床診斷！

細(xì)胞傳代：

1. HCMEC/D3永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞試驗(yàn)準(zhǔn)備：200ul/1mlTip 頭各一盒(以上物品均需高壓滅菌)，酒精棉球，廢液缸，試管架，微量移液器，記號筆，培養(yǎng)皿，離心管。

2. 棄掉培養(yǎng)皿中的培養(yǎng)基，用 1ml 的 PBS 溶液洗滌兩次。

3. 用 Tip 頭加入 1ml Trypsin 液，消化 1 分鐘(37℃，5%CO2 )。用手輕拍培養(yǎng)瓶壁，觀察到細(xì)胞從壁上脫落下來為止。

4. 加入 1ml 的含血清培養(yǎng)基終止反應(yīng)。

5. 用 Tip 頭多次吹吸，使細(xì)胞分散開。

6. 將培養(yǎng)液裝入離心管中，1000rpm 離心 5min。

7. 用培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，細(xì)胞計(jì)數(shù)后選擇 0.8X106 個細(xì)胞加入一個 35mm 培養(yǎng)皿。

8. 將合適體積培養(yǎng)液加入離心管中，混勻細(xì)胞后輕輕加入培養(yǎng)皿中，使其均勻分布。

9. 將培養(yǎng)皿轉(zhuǎn)入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，第二天轉(zhuǎn)染。

細(xì)胞轉(zhuǎn)染：

1. 轉(zhuǎn)染試劑的準(zhǔn)備

① 將 400ul 去核酸酶水加入管中，震蕩 10 秒鐘，溶解脂狀物。

② 震蕩后將試劑放在－20 攝氏度保存，使用前還需震蕩。

2. 選擇合適的混合比例(1：1－1：2/脂質(zhì)體體積：DNA 質(zhì)量)來轉(zhuǎn)染細(xì)胞。在一個轉(zhuǎn)染管中加入合適體積的無血清培養(yǎng)基。加入合適質(zhì)量的 MyoD 或者 EGFP 的 DNA，震蕩后在加入合適體積的轉(zhuǎn)染試劑，再次震蕩。

牙本質(zhì)磷蛋白封閉多肽	產(chǎn)氣莢膜梭狀芽孢桿菌型PCR檢測試劑盒
肉孢子蟲通用PCR試劑盒	電壓門控鉀通道抗體ELISA試劑盒
人β1,4-N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移mei2(B4GALNT2)ELISA試劑盒	蛋白O-葡萄糖基轉(zhuǎn)移mei1ELISA試劑盒
人超磷suan化微管相關(guān)蛋白tau(hyper phosphorylated MAPT)試劑盒ELISA	細(xì)胞周期suOELISA試劑盒
人ICE蛋白mei激活因子(IRAP)檢測試劑盒elisa	乙?；?/span>meiELISA試劑盒
人鵝膏蕈堿ELISA試劑盒	百日咳病毒抗體ELISA試劑盒
GR6蛋白封閉多肽	傳染性造血器官壞死病毒(IHNV)核suan檢測試劑盒
RASAL3蛋白封閉多肽	氣管比翼線蟲PCR試劑盒
CD99封閉多肽	高致病性豬藍(lán)耳病病毒(PRRSV-M)核suan檢測試劑盒
腫瘤壞死因子配體超家族成員14封閉多肽	霍亂弧菌01和0139群PCR檢測試劑盒
ChAT乙酰轉(zhuǎn)移mei封閉多肽	馬秋博病毒PCR檢測試劑盒
1號染色體開放閱讀框200封閉多肽	HCMEC/D3永生化人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞禽傳染性法氏囊病毒(IBDV)核suan檢測試劑盒
FBLIM1蛋白封閉多肽	蕎麥源性成分PCR試劑盒
硫氧還蛋白還原mei封閉多肽	馬生殖泰勒氏菌PCR試劑盒
GalNAc-T6蛋白封閉多肽	馬皰疹病毒通用PCR試劑盒

細(xì)胞培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)基本操作：
①進(jìn)無菌室前要洗手，按規(guī)定穿隔離衣。開始操作前要用75%酒精棉球擦手、擦瓶口和燒灼瓶口。
②操作者動作要輕，安裝吸管帽、打開或封閉瓶口等操作應(yīng)在火焰近處并經(jīng)過燒灼進(jìn)行。但要注意，金屬器械不能在火焰中長時(shí)間燒灼，以防退火；燒過的器械要冷卻后才能使用；已吸過培養(yǎng)液的吸管不能再用火焰燒灼，因殘留在吸管內(nèi)的培養(yǎng)液成分如蛋白質(zhì)等燒焦后會產(chǎn)生有害物質(zhì)，吸管再用時(shí)會將其帶到培養(yǎng)液中；膠塞、橡皮乳頭及塑料的細(xì)胞培養(yǎng)用品過火焰是也不能時(shí)間太長，以免燒焦產(chǎn)生有毒氣體，危害培養(yǎng)細(xì)胞，同時(shí)塑料細(xì)胞培養(yǎng)用品也會產(chǎn)生變形影響使用。
③使用培養(yǎng)液前不宜過早開瓶，開瓶后的培養(yǎng)液應(yīng)保持斜位，避免直立，以防止下落細(xì)菌的污染。不再使用的培養(yǎng)液應(yīng)立即封閉瓶口，培養(yǎng)的細(xì)胞在處理之前勿過早暴露在空氣中。
④操作時(shí)盡量不要談話，咳嗽以防止來自唾沫和呼出的氣流所造成的污染。
⑤吸取培養(yǎng)液、細(xì)胞懸液時(shí)，應(yīng)專管專用，一旦發(fā)現(xiàn)吸管口接觸了手和其他污染物品應(yīng)棄去，以防止污染擴(kuò)大或造成培養(yǎng)物之間的交叉污染。
⑥操作完畢后應(yīng)整理好工作臺面，用消毒水浸泡的紗布擦拭臺面；防止細(xì)胞交叉污染：所有從別處轉(zhuǎn)來的或是自己所建的細(xì)胞系都要早期留有的充足的凍存儲備，一旦懷疑發(fā)生交叉污染，可做細(xì)胞遺傳學(xué)方面的鑒定，如發(fā)現(xiàn)原有的細(xì)胞遺傳物發(fā)生改變，可以復(fù)蘇早期凍存的細(xì)胞使用。