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120次人趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)檢測試劑盒實驗材料與試劑配制:
1.儀器與材料:酶標(biāo)儀(使用前預(yù)熱30分鐘),微量加液器、吸頭、蒸餾水或去離子水,濾紙。
2.洗液的配制:按1:30的比例配制洗液備用。
操作步驟:
1.取出試劑盒,室溫(20-25℃)放置 30 分鐘。
2.分組:取出 96 孔板,根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù),把剩余的板條繼續(xù)冷藏處理。分別設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品組(6 個濃度)、空白孔、待測樣品組。
標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋:準(zhǔn)備小試管6 只,依次編好號碼,先在各小試管中加入標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液100ul,然后取原濃度標(biāo)準(zhǔn)品100ul 加入一只已編好號的試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第二支試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第三只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第四只試管中,充分混勻;再在該試管中取100ul 加入第五只試管中,充分混勻;然后在該試管中取100ul,棄掉。第六只試管作為0 號標(biāo)準(zhǔn)品。稀釋后各管濃度分別是:800ng/L,400ng/L,200ng/L,100ng/L,50ng/L ,0ng/L。
注:為減少實驗誤差,保證準(zhǔn)確性,建議設(shè)置復(fù)孔。
3.加樣:依照標(biāo)準(zhǔn)品的順序分別加入 50ul 的標(biāo)準(zhǔn)品溶液于空白微孔中;空白對照孔加入 50ul 的蒸餾水;其余微孔中先加樣品 40ul 然后再加生物素標(biāo)記的抗 IFN-γ 抗體 10ul。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻。
4.溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。
5.洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
6.加酶標(biāo)溶液:標(biāo)準(zhǔn)品組、待測樣本組各孔中加入 50ul 的酶標(biāo)溶液(空白對照孔除外)。
7.溫育:酶標(biāo)板用封板紙密封后,放入濕盒內(nèi)于 37℃恒溫孵育 1 小時。
8.洗板:用稀釋后的洗滌液注滿每孔,靜置 15-30s,充分清洗酶標(biāo)板 5 次,用吸水紙*拍干。
9.顯色:各孔加入顯色劑 A 液 50ul 后,再加入顯色劑 B 液 50ul。
10.終止:25-37℃下避光反應(yīng) 10-15 分鐘,加入 50ul 終止液。
11.讀板:在 450nm 波長讀取各孔的 OD 值。
注:讀板時必須拭干板底殘留的液體和手指痕跡,讀板時間控制在終止反應(yīng)后的 30 分鐘內(nèi),以免影響準(zhǔn)確性。
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大鼠內(nèi)皮素1(ET-1)ELISA Kit,48T/96T
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人趨化因子C-C-基元配體14(CCL14)檢測試劑盒
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