細(xì)胞凍存操作過(guò)程注意事項(xiàng)：

1. 為保持細(xì)胞最大存活率，一般都采用慢凍存融的方法。

2. 凍存物距液氮面越近溫度越低。標(biāo)準(zhǔn)的低凍速度為－1℃~12℃/ 分鐘，當(dāng)溫度下降達(dá)－25℃時(shí)，下降速度可增至－5~－10℃/ 分鐘，到－100℃時(shí)則可迅速凍入液氮中。因此要適當(dāng)掌握凍存物下降入液氮中的速度，過(guò)快能影響細(xì)胞內(nèi)水分透出，太慢則促冰晶形成。

3. 初次凍存者在下降凍存時(shí)，宜先用細(xì)木棒伸入罐中探測(cè)液面位置，然后需用溫度計(jì)與凍存物并行的辦法，以觀測(cè)下降凍存物的速度、凍存物與液氮液面距離和溫度三者關(guān)系，當(dāng)已掌握以上各參數(shù)和凍存技術(shù)熟練后，僅按下降時(shí)間和下降距離便可獲理想凍存效果。

4. 各種細(xì)胞對(duì)凍存速度的要求也不一樣；上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞耐受性可能大些，骨髓干細(xì)胞－2~－3℃/ 分鐘合適；胚胎細(xì)胞耐受性較小，不宜太快?？傊谝婚_(kāi)始時(shí)，下降速度不能超過(guò)－10℃/ 分鐘。

5. 用什么防護(hù)劑合適和用量多大，要依細(xì)胞而定，初代培養(yǎng)細(xì)胞用 DMSO 較好，一般細(xì)胞可用甘油；用量以較小為好。有人認(rèn)為人皮膚上皮細(xì)胞貯存在 20%-30% 甘油中很好。

6. 原則上細(xì)胞在液氮中可貯存多年，但為妥善起見(jiàn)，凍存一年后，應(yīng)再?gòu)?fù)蘇培養(yǎng)一次，然后再繼續(xù)凍存。

7. 將凍存管放入液氮容器或從中取出時(shí)，要做好防護(hù)工作，以免凍傷

8. 注意自身的安全，對(duì)于來(lái)自人源性或病毒感染的細(xì)胞株應(yīng)特別小心。操作過(guò)程中，應(yīng)避免引起氣溶膠的產(chǎn)生，小心有毒性試劑例如 DMSO，并避免尖銳物品傷人等。