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PCR“平臺效應(yīng)”相關(guān)因素介紹

時(shí)間:2024/7/22閱讀:370
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“平臺效應(yīng)"是指PCR后期循環(huán)產(chǎn)物累積趨于飽和,使原來以指數(shù)增長的速率變成平坦的曲線,同時(shí)出現(xiàn)非特異產(chǎn)物的大量增加的現(xiàn)象。下列因素可能與平臺效應(yīng)有關(guān):

1dNTP或引物的消耗量。

2)反應(yīng)物的穩(wěn)定度(dNTP或酶)

3)最終產(chǎn)物的阻化作用(焦磷酸鹽、雙鏈DNA)。

4)非特異產(chǎn)物或引物二聚體與反應(yīng)物的競爭。

5)產(chǎn)物在高濃度時(shí)變性不全,影響引物的延伸。

6)酶與PCR產(chǎn)物的結(jié)合,使酶分子減少。

合理的PCR循環(huán)參數(shù),能最大限度地避免這些因素對產(chǎn)物擴(kuò)增的影響。

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