幾種常用細胞培養(yǎng)配套試劑的配置(緩沖液、平衡鹽溶ye等)。
1、無鈣、鎂、離子溶液(1000ml)
氯化鈉(NaCl)8g磷酸二氫na、(NaH2PO4H20)0.05g、碳酸氫na(NaHCO3)1g、檸檬酸三鈉(Na3C6H5O7,H20)1g、葡萄糖1g、加去離子水或雙蒸水至1000mL
2、PBS(Phosphate-Buffered saline)磷酸鹽緩沖液
甲液:0.2mol/L磷酸氫二na溶液、磷酸氫二na(無水)28.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
乙液:0.2mol/L磷酸二氫na溶液、磷酸二氫na(無水)2.4g、氯化鈉8.77g加去離子水或雙蒸水至1000mL
甲、乙液于4℃保存,使用時按表3-2所示比例,配制成所需pH濃度,高壓滅菌后室溫保存。
3、Hanks液(HBSSHank's Balanced salt solution)
⑴ 母液甲(20x)配法
①NaCl(A.R)160g、KCl(A.R)8g、MgSO4.7H2O(A.R)2g、MgCl.6H2O(A.R)2g依次溶于800mL雙蒸水中,前一物質溶后再加后一種。
②CaCl2(A.R)2.8g溶于100mL雙蒸水中,溶時不斷攪拌(此液應單配,單溶)。
待上述兩溶液中的"溶質"全溶后,將它們混合,再用雙蒸水補至1000mL,向其中加2mL作為防腐劑,置4℃保存。
⑵ 母液乙(20×)配法
①Na2HPO4.12H2O(A.R)3.04g、KH2PO4(A.R)1.20g、葡萄糖(A.R)20.0g溶于800ml雙蒸水中。
②0.4%酚紅液0.4g酚紅放在玻璃研缽后加0.01N、NaOH11.28mL,直到全部溶解,移入100mL容量瓶中,加水至100mL,過濾,pH為7.4,4℃保存。
待上述各"溶質"*溶解后,用雙蒸水補至1000mL,其中加2mL作防腐劑,置40℃保存。
(3) 使用液(1×)配法
取母液甲和母液乙各一份,加雙蒸水18份,分裝后,塞好瓶塞,掛上標志。以115℃高壓滅菌25分鐘(以免葡萄糖破壞),置室溫后4℃保存,可使用幾個月。臨用前,用7.5%NaHCO3調至所需pH。
4、Eagle's液(EBSSEagle's Balanced salt solution)
是一種在二氧化碳(CO2)環(huán)境中短期維持細胞活性的平衡鹽溶ye,可用于細胞解離前的清洗、細胞或組織的運輸、細胞計數(shù)時稀釋、溶液的配置等。
5、HEPES液
生物緩沖液,化學性質穩(wěn)定,在PH7.2~7.6范圍內,比NaHCO3緩沖液的緩沖能力更強。
6、NaHCO3緩沖液
常規(guī)緩沖體系的一部分,但是不穩(wěn)定,易受空氣中CO2的含量而改變PH值,影響緩沖效果。
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