使用方法：

1、將ELISA試劑盒各組分恢復(fù)室溫（大約30分），同時用純水將20×洗滌液配成工作液（每份濃縮洗滌液加19份純水）。

2、取出酶標(biāo)板；扣取適量酶標(biāo)板條，每個標(biāo)本需要8孔，陽性對照8孔，陰性對照8孔。多余的用自封袋保存，記得放入干燥劑。

3、將標(biāo)本檢測孔每孔先加入標(biāo)本稀釋液各50μl。然后將50μl細(xì)胞培養(yǎng)上清（或特異親和純化的抗體）再加入酶標(biāo)微孔板，每個標(biāo)本加8孔；陽性對照和陰性對照孔不加標(biāo)本稀釋液，各加8孔每孔100μl。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

4、反應(yīng)完畢后棄去板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。再在每個標(biāo)本的8孔中分別加入8種酶標(biāo)二抗各100μl，通用陽性、陰性對照的各孔也一樣。在加樣圖上或酶標(biāo)板上做好標(biāo)記。貼上封板膜37℃溫育30分鐘。

5、吸棄板內(nèi)液體，洗板5遍后在不掉纖維的吸水材料上拍干或機洗5遍。每孔分別加入單組份TMB底物液100μl，封板膜貼板避光37℃顯色20分鐘。

6、本試劑盒特異性好，可肉眼觀察顯色結(jié)果，確定顯色孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗判斷此標(biāo)本的Ig類或亞類。也可將反應(yīng)終止液（每孔50μl）終止反應(yīng)后用酶標(biāo)儀450nm測定波長，630nm參考波長雙波長測定結(jié)果，參看高值孔所對應(yīng)的酶標(biāo)二抗判定此標(biāo)本的Ig類或亞類(陽性對照OD一般不小于0.8，陰性對照一般不高于0.15，陽性判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品OD大于陰性O(shè)D+0.15，陰性O(shè)D低于0.05按0.05算)。

注：單抗屬于雜交瘤融合得來，存在一定比例的變異，另外，如果待檢樣品濃度太高也容易造成背景偏高，原則上以高值孔對應(yīng)的亞類為準(zhǔn)！

注意事項：

1.  本試劑盒實際壽命遠比標(biāo)示的有效期更長，超過有效期后可能仍可使用，但是不建議您使用，請您在有效期內(nèi)使用；超過有效期使用產(chǎn)品產(chǎn)生的問題不在售后范疇。

2.  由于腹水成分十分復(fù)雜，本試劑盒不建議用于腹水檢測，如果需要檢測腹水，請購買本公司其他試劑盒；如果確實需要用本試劑盒檢測腹水亞型，建議將腹水稀釋1-5萬倍，同時使用自包被的抗原板子替代本試劑盒中的酶標(biāo)板，此種情況下本試劑盒中的陽性對照可能不能正常工作。

3.  手工洗板時，洗液要加滿板孔，浸泡10秒然后棄盡，最后要拍干凈。加入的酶標(biāo)二抗溫育后，要把酶標(biāo)液吸凈，不要直接甩出，這個在手工洗板時對結(jié)果很重要。

4.  一次沒用完的板子要帶干燥劑放自封袋封好，隨盒存放。

5.  拿放加樣后的板子不要劇烈抖動，以免孔間交叉污染出現(xiàn)錯誤結(jié)果。

6.  本試劑一般不會出現(xiàn)兩個陽性，但出現(xiàn)兩個陽性的現(xiàn)象現(xiàn)實中是真實存在的，一般會取高OD值判為陽性，出現(xiàn)這種情況有多重原因：

1）培養(yǎng)的細(xì)胞中有“飼養(yǎng)細(xì)胞"殘留；

2）由于單抗研制存在人工干預(yù)步驟因此抗體本身有可能會存在亞類結(jié)構(gòu)上的輕微變異； 

3）樣品為非特異親和純化的抗體或樣品是腹水，

4）上清出現(xiàn)少量污染；

5）實驗操作粗放；

6）加錯試劑；

7）樣品中抗體濃度太高。