酶聯(lián)免疫試劑盒操作步驟：
1、準(zhǔn)備：從冰箱取出試劑盒，室溫復(fù)溫平衡30分鐘。
2、配液：用蒸餾水將20倍濃縮洗滌液稀釋成原倍的洗滌液。
3、加標(biāo)準(zhǔn)品和待測樣本：取足夠數(shù)量的酶標(biāo)包被板，固定于框架上，分別設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測樣本孔和空白對照孔，記錄各孔位置，在標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μL；待測樣本孔中先加入待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL(即樣本稀釋5倍)；空白對照孔不加。
4、溫育：37℃水浴鍋或恒溫箱溫育30min。
5、洗板：棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復(fù)洗板4次(也可用洗板機(jī)按說明書操作洗板)。
6、加酶標(biāo)工作液：每孔加入酶標(biāo)工作液50μL，空白對照孔不加。
7、溫育：重復(fù)4的操作。
8、洗板：重復(fù)5的操作。
9、顯色：每孔先加入顯色劑A 液50μL，再加入顯色劑B液 50μL，37℃避光顯色15min。
10、終止：取出酶標(biāo)板，每孔加終止液50μL，終止反應(yīng)(顏色由藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
11、測定：以空白孔調(diào)零，在終止后15分鐘內(nèi)，用450nm波長測量各孔的吸光值(OD值)。
12、計算：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對應(yīng)的OD值，計算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程，再根據(jù)樣本的OD值，在回歸方程上計算出對應(yīng)的樣品濃度，也可以使用各種應(yīng)用軟件來計算。zui終濃度為實(shí)際測定濃度乘以稀釋倍數(shù)。

酶聯(lián)免疫試劑盒特性：
1、應(yīng)盡量選擇正規(guī)，產(chǎn)品經(jīng)相應(yīng)部門審核認(rèn)可，試劑應(yīng)從靈敏度、特異性、精密度、穩(wěn)定性、簡便性。
2、靈敏度：有二層含義，1）為試劑檢出被檢物質(zhì)的量的能力；2）為試劑對大量樣品中陽性檢出的能力。
3、特異性：常用交叉反應(yīng)率表示。含有與待測物相近結(jié)構(gòu)部份的物質(zhì)可能存在交叉反應(yīng)，使測定結(jié)果升高，可能導(dǎo)致假陽性，所以交叉反應(yīng)是評價其質(zhì)量的關(guān)鍵指標(biāo)。
4、精密度：elisa試劑一般指其批內(nèi)cv%，其值應(yīng)小于15%；定量試劑應(yīng)同時考察線性范圍。
5、準(zhǔn)確度：通過添加回收實(shí)驗進(jìn)行評價。
6、簡便性：指在不影響試劑的前三項指標(biāo)的前題下，實(shí)驗和測定步驟越少越好，在定性實(shí)驗中結(jié)果判斷簡單明了，定量試驗結(jié)果計算也應(yīng)簡單。
7、安全性：指試劑對操作者和環(huán)境anquan無害無傳染性。
8、經(jīng)濟(jì)性：試劑在同等質(zhì)量條件下通過大規(guī)?；蚣夹g(shù)進(jìn)步降低成本，而市場價格比較合理。
9、試劑評價：產(chǎn)品僅用于科研需要有的確證方法和確證的樣品進(jìn)行檢測。