高質(zhì)量菌群DNA提取方法,包括糞便采集、保存和提取,采集的適量新鮮糞便溶解于在采樣管中的緩沖液中形成樣品保存,然后對緩沖液中新鮮糞便菌群進行預處理,去除緩沖液后形成糞便沉淀,然后進行菌群DNA提??;
其特征在于:
對菌群DNA提取包括以下步驟:
1.、裂解分離;該步驟中:在糞便沉淀中加入裂解緩沖液,于40-70℃條件下靜置1.5?2.5h,離心分離,取上清液,用混合有機溶劑抽提出DNA;
2.析出;該步驟中:向含DNA的抽提液中加入0.1~1倍體積2~4M濃度的NaAC和1~2倍體積的無水乙醇充分混勻后于?10~?30℃條件下靜置0.5~lh,離心分離,析出DNA沉淀,將析出的DNA沉淀室溫下干燥;
3.純化處理;該步驟中:向沉淀中加pH6~7的Tris?HCI緩沖液和硫氰酸胍(GuSCN)至DNA沉淀*溶解,然后加入二氧化硅微珠懸浮液,搖勻,離心分離,用50?80%乙醇洗滌硅珠沉淀,分離,脫去硅珠中殘存的乙醇后加入TE液洗脫,離心分離得到含DNA的TE液。
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