ELISA預(yù)實(shí)驗(yàn)通常預(yù)實(shí)驗(yàn)包括全部標(biāo)準(zhǔn)曲線和小量樣本。預(yù)實(shí)驗(yàn)有兩個(gè)主要目的，一來是熟悉實(shí)驗(yàn)流程，發(fā)現(xiàn)可能忽略的問題；二來是測試樣本和試劑盒是否匹配，一旦出現(xiàn)不匹配的情況，不至于浪費(fèi)過多樣本。另外是對(duì)樣品中目的分析物的豐度作一下大致了解，以確定合適稀釋度。

ELISA 樣本收集有講究:以血清為例，樣本收集可參考試劑盒說明書，但需注意以下要點(diǎn)。樣本盡量用無菌管收集，避免細(xì)菌的酶類和代謝產(chǎn)品對(duì)結(jié)果的影響。采集過程要避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞溶解釋放的活性物質(zhì)可能會(huì)影響檢測。保存過程中如有沉淀，應(yīng)離心后取上清液。樣本若不立即測定，建議按照每次使用量分裝保存在 -20℃，每次檢測使用一管，即避免交叉污染和反復(fù)凍融，有能保證檢測結(jié)果的平行可比性。

ELISA 實(shí)驗(yàn)前要準(zhǔn)備好相應(yīng)試劑:提前將所有試劑平衡到室溫環(huán)境，這個(gè)過程大致需半小時(shí)左右。洗液是濃縮液，如有結(jié)晶析出，需*溶解后再進(jìn)行稀釋。A、B 兩管顯色底物在使用前15分鐘按 1:1 配成混合液。為保證蛋白標(biāo)準(zhǔn)品溶液配制質(zhì)量，蛋白標(biāo)準(zhǔn)品為凍干粉，重溶前需將管子離心，加入說明書的緩沖液，慢速在搖床上搖勻或顛倒混勻，至少 15 分鐘，不建議用槍頭吹打。溶解后如需保存，按每次使用量分裝后根據(jù)說明書要求的溫度保存。梯度稀釋蛋白標(biāo)準(zhǔn)品時(shí)，建議用聚丙烯管（對(duì)蛋白吸附力很低），每步都要充分混勻且更換新槍頭，確保梯度準(zhǔn)確性。

ELISA儀器設(shè)備的準(zhǔn)備也*:相關(guān)設(shè)備包括移液器、洗板機(jī)/搖床和酶標(biāo)儀。移液器的準(zhǔn)確性對(duì)于ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性十分關(guān)鍵，需要確保定期校準(zhǔn)維護(hù)。搖床的使用是為了讓反應(yīng)體系快速達(dá)到平衡，獲得穩(wěn)定、可重復(fù)的結(jié)果。不用搖床對(duì)實(shí)驗(yàn)通常的影響是，OD 值低，CV 大。酶標(biāo)儀等設(shè)備使用前提前 15 分鐘開機(jī)預(yù)熱。