1.包被抗原的挑選
ELISA試劑盒包被抗原可分為天然蛋白、重組蛋白和小分子抗原三大類.天然蛋白需經(jīng)純化才能用直接吸附法包被,對(duì)于含雜質(zhì)較多的抗原能夠選用間接捕獲法包被(先用能夠與意圖抗原反響的物質(zhì)如抗體直接吸附在酶標(biāo)板上,再通過特異性反響使抗原固相化).ELISA試劑盒經(jīng)純化的重組蛋白一般皆可直接包板.小分子抗原比方多肽以及一些小分子有機(jī)化合物,因?yàn)榉肿恿刻?往往難于直接吸附在酶標(biāo)板上,一般都先使其與無關(guān)蛋白質(zhì)如BSA等偶聯(lián),偶聯(lián)物吸附于固相載體上.
2.包被液的挑選
一般常用的是pH9.6的碳酸鹽緩沖液,如果包被的抗原在堿性條件下不穩(wěn)定的話,也能夠運(yùn)用pH7.2的磷酸鹽緩沖液.
3.包被溫度的挑選
通常是4-8度條件下過夜或許37度保溫2小時(shí),我們強(qiáng)烈建議4-8度條件下包被,有利于蛋白活性的堅(jiān)持.
4.包被濃度的挑選
ELISA試劑盒包被的zui適濃度隨固相載體和包被物的性質(zhì)改變,一般蛋白質(zhì)的包被濃度為1-5ug/ml,要清晰針對(duì)特定包被抗原的zui適包被濃度需要通過試驗(yàn)來斷定.
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