ELISA試劑盒操作步驟
1. 加樣：規(guī)范品設(shè)定5個(gè)濃度點(diǎn)10個(gè)孔，每個(gè)濃度設(shè)定平行孔，參加50微升不同濃度的規(guī)范品，空白孔設(shè)定1個(gè)孔參加50微升蒸餾水（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其他各步操作相同）、待測(cè)樣品孔，在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測(cè)樣品10μl（樣品終究稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，悄悄晃動(dòng)混勻。
2. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
3. 配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗刷液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋后備用。
4. 洗刷：當(dāng)心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗刷液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
5. 加酶：每孔參加酶標(biāo)試劑50μl，空白孔在外。
6. 溫育：操作同2。
7. 洗刷：操作同4。
8. 顯色：每孔先參加顯色劑A50μl，再參加顯色劑B50μl，悄悄震動(dòng)混勻，37℃避光顯色15分鐘.
9. 停止：每孔加停止液50μl，停止反響（此刻藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
10. 測(cè)定：以空白空調(diào)零，450nm波長(zhǎng)依序丈量各孔的吸光度（OD值）。 測(cè)定應(yīng)在加停止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
ELISA試劑盒注意事項(xiàng)：
1． 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可運(yùn)用，酶標(biāo)包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
2． 濃洗刷液可能會(huì)有結(jié)晶分出，稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶，洗刷時(shí)不影響成果。
3． 各步加樣均應(yīng)運(yùn)用加樣器，并常常校正其準(zhǔn)確性，以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)刻控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，*運(yùn)用排槍加樣。
4． 請(qǐng)每次測(cè)定的一起做規(guī)范曲線，做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于規(guī)范品孔*孔的OD值），請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測(cè)定，核算時(shí)請(qǐng)zui終乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。
5． 封板膜只限一次性運(yùn)用，以避免交叉污染。
6． 底物請(qǐng)避光保存。
7． 嚴(yán)格依照說明書的操作進(jìn)行，試驗(yàn)成果斷定有必要以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
8． 一切樣品，洗刷液和各種廢棄物都應(yīng)按感染物處理。
9． 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
ELISA試劑盒核算：
以規(guī)范物的濃度為橫坐標(biāo)，OD值為縱坐標(biāo)，在坐標(biāo)紙上繪出規(guī)范曲線，依據(jù)樣品的OD值由規(guī)范曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用規(guī)范物的濃度與OD值核算出規(guī)范曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，核算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實(shí)踐濃度。
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