我司全體ELISA試劑盒產(chǎn)品熾熱*，*，質(zhì)量保證，產(chǎn)品買的多扣頭就多，另有禮品贈(zèng)送。我司主營(yíng)現(xiàn)貨產(chǎn)品有ELISA試劑盒、規(guī)范品、抗體、染色液、血清、細(xì)胞株、培育基等，訂貨！本公司產(chǎn)品僅用于科研運(yùn)用，不供臨床實(shí)驗(yàn)。
一、勻漿介質(zhì)（量）
一般采用0.05mol/LTris-HCl,pH7.4磷酸鹽緩沖液(PBS),客戶可依據(jù)樣本及測(cè)定目標(biāo)的狀況自行設(shè)定濃度,意圖是堅(jiān)持樣本的等滲環(huán)境。
二、細(xì)胞樣本的前處理:
1、細(xì)胞沉積的搜集：
①懸浮細(xì)胞:關(guān)于懸浮培育的細(xì)胞，直接經(jīng)過(guò)離心搜集細(xì)胞沉積，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉積。
②貼壁細(xì)胞:關(guān)于貼壁培育的細(xì)胞，用*將細(xì)胞消化下來(lái)，或用細(xì)胞刮將細(xì)胞刮下來(lái)，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉積。
我們一般主張客戶，細(xì)胞密度不要小于一百萬(wàn)個(gè)/ml。
2、ELISA試劑盒細(xì)胞沉積的洗刷：
在細(xì)胞沉積中參加0.5-1ml的PBS（等滲），悄悄倒置混勻，將培育液在室溫條件下1000轉(zhuǎn)/分,離心10分鐘，棄上清留細(xì)胞沉積。重復(fù)上述操作重復(fù)洗刷1～2次。
3、勻漿的辦法：手藝勻漿，超聲破碎,裂解液裂解,重復(fù)凍融。
①手藝勻漿：在細(xì)胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測(cè)目標(biāo)的不同而有所改動(dòng)，一般參加0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，用移液器將細(xì)胞懸浮液移至玻璃勻漿管中（2ml玻璃勻漿管），將玻璃勻漿管置于冰水混合物中，手動(dòng)勻漿3分鐘，然后取破碎好的細(xì)胞懸浮液進(jìn)行測(cè)定。
②超聲破碎:
在細(xì)胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測(cè)目標(biāo)的不同而有所改動(dòng)，一般參加0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，在冰水浴條件下進(jìn)行如下操作:
a、用超聲粉碎機(jī)進(jìn)行粉碎，可用Soniprep150型超聲波發(fā)生器以振幅14微米超聲處理30秒使細(xì)胞破碎，也可用國(guó)產(chǎn)超聲波發(fā)生儀，用400安培，5秒/次，空隙10秒重復(fù)3～5次。
b、用超聲細(xì)胞破碎儀，300W功率，每次超聲3～5秒，間隔30秒，重復(fù)4～5次。
③裂解液裂解
常用裂解液有SDS、NP-40、TritonX-100,這三種去垢劑的效果是不同的，或者說(shuō)效果力量強(qiáng)弱不同。
1、SDS歸于離子型去垢劑，zui厲害，根本能夠把細(xì)胞*破掉，DNA會(huì)釋放出來(lái)，裂解液變得很粘稠。
2、NP-40是很溫文的去垢劑，1%濃度的根本能夠損壞掉胞膜，而對(duì)核膜損壞的效果弱，結(jié)合特定的buffer能夠獲得胞漿蛋白。
3、TritonX-100的能力介于NP40和SDS之間，傾向于NP40，也是常用的細(xì)胞裂解液成分之一，在維護(hù)蛋白活性方面有必定效果（SDS根本會(huì)使蛋白變性失活）。
去垢劑特點(diǎn)僅僅一方面，buffer、配比、濃度、提取辦法和資料處理也都是關(guān)鍵因素
因?yàn)樵S多裂解液都是蛋白變性劑,對(duì)酶生機(jī)的測(cè)定有必定的影響,一般不引薦用裂解液進(jìn)行裂解。
④重復(fù)凍融:
ELISA試劑盒在細(xì)胞沉積中參加必定量的PBS（PBS的參加量依據(jù)所測(cè)目標(biāo)的不同而有所改動(dòng)，一般參加0.5ml，細(xì)胞密度不小于一百萬(wàn)個(gè)/ml），混勻，將細(xì)胞懸浮于PBS中，放低溫冰箱中結(jié)冰，溶解，再結(jié)冰，再溶解，重復(fù)3次左右）。因?yàn)橹貜?fù)凍融對(duì)酶生機(jī)影響較大,一般不引薦運(yùn)用。