ELISA試劑盒陽性判定值（cut-off value）通常為陰性對照A值加上一個特定的常數(shù)，以此作為區(qū)分效果陽性或陰性的標(biāo)準(zhǔn)。
用此法區(qū)分效果懇求實(shí)驗(yàn)條件十分穩(wěn)定，試劑的制備有必要標(biāo)準(zhǔn)化，陽性和陰性的對照品應(yīng)契合一定的標(biāo)準(zhǔn)，須配用精細(xì)的儀器，并嚴(yán)峻按規(guī)矩操作。
ELSIA試劑盒中的陰性對照品為不含HBsAg的復(fù)鈣人血漿，目視法簡捷明晰，但頗具主觀性。
測得A值后，先計(jì)算陰性對照A值的平均數(shù)（NC X ）和陽性對照A值的平均數(shù)（PCX），兩個平均數(shù)的差（P-N）有必要大于一個特定的數(shù)值（例0.400），實(shí)驗(yàn)才有用。
ELISA試劑盒實(shí)驗(yàn)3個陰性對照A值均應(yīng)≥0.5×NCX，并≤1.5×NCX，如其中之一超出此規(guī)劃，則棄去，算了另兩個陰性對照從頭計(jì)算NCX；
如有兩個陰性對照A值超出以上規(guī)劃，則該次實(shí)驗(yàn)無效。
在條件許可下，應(yīng)該用比色計(jì)測定吸光值，這么可以得到客觀的數(shù)據(jù)。
現(xiàn)舉某種查看 HBsAg的試劑盒為例。
?先讀出標(biāo)本（sample，S）、陽性對照（P）、和陰性對照（N）的吸光值，然后進(jìn)行計(jì)算。
計(jì)算辦法有多種，大致可分為陽性判定值法和標(biāo)本與陰性對照比值法兩類。
?陽性對照品HBsAg的含量標(biāo)明為P=9±2ng /ml。每次實(shí)驗(yàn)設(shè)2個陽性對照和3個陰性對照。
ELISA試劑盒陽性判定值公式中的常數(shù)是在這特定的體系中通過對很多標(biāo)本的實(shí)驗(yàn)查看而得到的。