在運(yùn)用前與室溫平衡，再進(jìn)行測(cè)定。在ELISA試劑盒中一般有兩次抗原抗體反應(yīng)，即加標(biāo)本和加酶聯(lián)絡(luò)物后?？乖贵w反應(yīng)的結(jié)束需求有必定的溫度和時(shí)間，這一保溫進(jìn)程稱為溫育（incubation），有人稱之為孵育，在ELISA試劑盒中似不恰當(dāng)。
ELISA試劑盒屬固相免疫測(cè)定，抗原、抗體的聯(lián)絡(luò)只在固相表面上發(fā)生。以抗體包被的夾心法為例，參與板孔中的標(biāo)本，其間的抗原并不是都有對(duì)等的和固相抗聯(lián)絡(luò)的時(shí)機(jī)，只要zui靠近孔壁的一層溶液中的抗原直接與抗體接觸。
1. 當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。
2. 洗刷進(jìn)程非常重要，不充分的洗刷易造成假陽性。
3. 一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi)，ELISA試劑盒如標(biāo)本數(shù)量多，舉薦運(yùn)用排槍加樣。
4. 請(qǐng)每次測(cè)定的一起做標(biāo)準(zhǔn)曲線，做復(fù)孔。
5. 如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定。
6. 在制作標(biāo)準(zhǔn)品、查看溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液制作，ELISA試劑盒不能混淆。
7. 底物請(qǐng)避光保存。
8、ELISA試劑盒控制好每一步的操作時(shí)間。
假如對(duì)試劑準(zhǔn)備不太留心，在實(shí)驗(yàn)時(shí)將試劑從冰箱中拿出來即用，而忽略了這種做法有或許影響后邊溫育時(shí)間不行的疑問影響后邊的操作。