大腸桿菌O157測試片24片/包
大腸埃希氏菌和耐熱大腸菌群測試片
1 原理及適用范圍：菌落總數(shù)是指樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL(g)檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數(shù)，是zui常用的檢測項目指標(biāo)。菌落總數(shù)測試片（Aerobic Count Plates BB202）是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標(biāo)準(zhǔn)的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑——氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紫紅色或粉紅色，這樣可縮短計數(shù)時間和增強(qiáng)計數(shù)效果。本產(chǎn)品適合于食品及水中菌落總數(shù)的測定，也可用于與食品接觸的容器操作臺和其他設(shè)備表面的衛(wèi)生檢測。
2 樣品處理與稀釋
2.1 生活飲用水：取充分混勻的水樣（原液）檢測。
2.2 水源水：以無菌操作方法吸取1mL充分混勻的水樣，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。
2.3 食品：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌生理鹽水的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，充分混勻成1:10稀釋液。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1mL，注入含有9mL滅菌生理鹽水的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的稀釋液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的稀釋液，每次換一支吸管。
3 接種：將菌落總數(shù)測試片（BB202）置于實驗臺面，揭開上層膜準(zhǔn)備接種。生活飲用水、純水和礦泉水取原液，每個樣品做兩片；水源水以及食品選擇2～3個稀釋度進(jìn)行檢測，每個稀釋度同時應(yīng)做一平行接種。以無菌操作方法用滅菌吸管吸取1mL混勻的樣品液，慢慢均勻地滴加到測試片上，然后再將上層膜緩慢蓋下，靜置5 min使培養(yǎng)基凝固，zui后用手輕輕地壓一下。每次檢測，同時將1mL滅菌生理鹽水滴加到另一片測試片上作為空白對照。
4 培養(yǎng)： 將測試片疊在一起放回原自封袋中，透明面朝上水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過12片。培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15～24h觀察結(jié)果。
5 結(jié)果判讀: 細(xì)菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點(diǎn)，選擇菌落數(shù)適中（10～100個）的測試片進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細(xì)菌菌落總數(shù)。作菌落計數(shù)時，可用眼睛直接觀察，必要時用放大鏡檢查，以防遺漏。在記下各測試片菌落數(shù)后，應(yīng)求出同稀釋度的平均菌落數(shù)，供下一步計算時用。
6 計數(shù)原則及報告方式
6.1通常選擇菌落在10～100個之間的測試片進(jìn)行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)報告之（見表1實例1）。
6.2若有兩個稀釋度的菌落數(shù)在10～100個之內(nèi)，兩者的比值小于2，則取其平均數(shù)，若大于2，則用值小者（見表1實例2、例3）。
6.3若三個稀釋度的菌落數(shù)都有在10～100個之內(nèi)，應(yīng)選擇二個低數(shù)值的平均數(shù)（見表1實例4）。
6.4若三個稀釋度的菌落數(shù)均小于10個或大于100個時，應(yīng)重新試用更低或更高的稀釋度進(jìn)行菌落計數(shù)；或采用均小于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui小值，或采用均大于數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)的zui大值（見表1實例5、例6）。
6.5若所有稀釋度的測試片均無生長，以未檢出報告之。菌落數(shù)在100以內(nèi)時按實有數(shù)報告，大于100時，采樣兩位有效數(shù)字，在兩位有效數(shù)字后面的數(shù)值，以四舍五入方法計算，為了縮短數(shù)字后面的零數(shù)也可用10的指數(shù)來表示。
表1 稀釋度選擇及菌落總數(shù)報告方式
實例 | 稀釋度 | 兩稀釋 度之比 | 選定計數(shù) 稀釋度 | 報告方式 （個/g或 個/mL） |
10-1 | 10-2 | 10-3 |
1 2 3 4 5 6 | 158 208 265 98 8 295 | 76 68 82 50 5 174 | 5 12 50 15 1 106 | — 1.8 6.1 — — — | 10-2 10-2、10-3 10-2 10-1、10-2 10-1 10-3 | 7.6×103 9.4×103 8.2×103 3.0×103 8.0×10 1.1×105 |
7 表面取樣方法：加1mL滅菌生理鹽水在測試片上，靜置至少1h使培養(yǎng)基凝固；提起上層膜，使*濾紙部分貼到待測物表面，用手在外側(cè)輕壓；然后將上蓋膜合上，置培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)。
方法原理：采用選擇性顯色培養(yǎng)基作為主要原料，加入專一性酶顯色劑，運(yùn)用微生物測試片技術(shù)，做成一次性快速檢驗產(chǎn)品，通過接種、培養(yǎng)，如果樣品中含有大腸桿菌O157:H7，即可在紙片上呈現(xiàn)紫紅色的菌落。
3操作方法
3．1樣品處理：無菌操作取25g（mL）樣品放入含有225mL無菌生理鹽水的采樣瓶或均質(zhì)杯內(nèi)，充分振搖或置均質(zhì)器中制成樣品勻液，靜置片刻。
3．2接種：將測試片水平放在臺面上，小心揭開上蓋膜，用滅菌吸管吸取1 mL樣品上清液或增菌液，均勻加到*的濾紙片上，然后輕輕將上蓋膜放下，靜置5min。每個樣品接種兩片。
3．3培養(yǎng)：將加了樣的測試片疊放在一起，放入原來的自封袋中，堆疊片數(shù)不超過12片，透明膜向上平放在37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)15h～24h。
3．4結(jié)果觀察：對測試片進(jìn)行觀察，呈紫紅色的菌落為大腸桿菌O157:H7；呈藍(lán)色的菌落為其他大腸菌群。
4附加說明
4．1本法還可應(yīng)用于從業(yè)人員體檢、中毒樣品和物體表面的檢測，用取樣棉簽涂抹被測物體表面，放入裝有3mL滅菌生理鹽水的試管中，搖晃10s，然后取1mL接種到測試片上。
4．2注意使用過的紙片上帶有活菌，需及時按照生物安全廢棄物處理原則進(jìn)行處理。
4．3出現(xiàn)陽性菌落的樣本，用其他更為可靠的方法進(jìn)行驗證，沒有條件的話至少再取樣重復(fù)檢驗一次。
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