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內(nèi)標法 internal standard method 是色譜分析中一種比較準確的定量方法,尤其在沒有標準物對照時,此方法更顯其*性。內(nèi)標法是將一定重量的純物質(zhì)作為內(nèi)標物(參見內(nèi)標物條)加到一定量的被分析樣品混合物中,然后對含有內(nèi)標物的樣品進行色譜分析,分別測定內(nèi)標物和待測組分的峰面積(或峰高)及相對校正因子,按下列公式和方法即可求出被測組分在樣品中的百分含量。
校正因子:
f= (As/ms)/(Ar/m)
其中As和Ar分別為內(nèi)標物和對照品的峰面積或峰高,ms和mr分別為加入內(nèi)標物和對照品的量。
再取各品種項下含有內(nèi)標物的待測組分溶液進樣,記錄色譜圖,再根據(jù)含內(nèi)標物的待測組分溶液色譜峰響應(yīng)值,計算含量(mi):
mi=f×Ai/(As/ms)
其中 Ai和As分別為供試品和內(nèi)標物的峰面積或峰高,ms為加入內(nèi)標物的量。必要時,再根據(jù)稀釋倍數(shù)、取樣量和標示量折算成為標示量的百分含量,或根據(jù)稀釋倍數(shù)和取樣量折算成百分含量。
當配制校正因子測定用的對照溶液和含有內(nèi)標物質(zhì)的待測組分溶液使用同一份內(nèi)標物質(zhì)溶液時,則配制內(nèi)標物質(zhì)溶液不必精密稱(量)取。
采用內(nèi)標法定量時,內(nèi)標物的選擇是一項十分重要的工作。理想地說,內(nèi)標物應(yīng)當是一個能得到純樣的已知化合物,這樣它能以準確、已知的量加到樣品中去,它應(yīng)當和被分析的樣品組分有基本相同或盡可能一致的物理化學性質(zhì)(如化學結(jié)構(gòu)、極性、揮發(fā)度及在溶劑中的溶解度等)、色譜行為和響應(yīng)特征,是被分析物質(zhì)的一個同系物。當然,在色譜分析條件下,內(nèi)標物必須能與樣品中各組分充分分離。需要指出的是,在少數(shù)情況下,分析人員可能比較關(guān)心化合物在一個復(fù)雜過程中所得到的回收率,此時,他可以使用一種在這種過程中很容易被*回收的化合物作內(nèi)標,來測定感興趣化合物的百分回收率,而不必遵循以上所說的選擇原則。g
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