1)染色體顯帶
顯Q帶法
1. 漂洗:取經(jīng)過干熱預(yù)處理或已老化的染色體標(biāo)本,置于pH6.0緩沖液中浸5~10分鐘。
2. 染色:浸入pH6.0的GM或QD染液中5~10分鐘。
3. 漂洗:浸入新鮮pH6.0緩沖液中漂洗兩次,每次5分鐘。
4. 觀察:向標(biāo)本染色體面滴1~2滴新鮮緩沖液,覆以蓋片(避免出氣泡),置熒光顯微鏡下觀察。
顯G帶法
*-Giemsa混合顯帶法
1.預(yù)處理:取中期染色體標(biāo)本,置60℃~60℃溫箱中20~30分鐘,或在37℃溫箱隔夜,然后浸入0.025M磷酸緩沖液中,pH6.8,56℃溫浴10分鐘。
2.消化和染色:用現(xiàn)配制的*-Giemsa混合液消化和染色10~30分鐘,混合液按如下比例配制:
0.025 M 磷酸緩沖液pH6.8 73.0 ml
甲醇 27.0 ml
Giemsa干粉 50.0 mg
0.25%* 0.3~0.4 ml
3.封片:染色后用自來水沖洗,入蒸餾水漂洗數(shù)次、晾干、二甲苯透明2~3分鐘,封入中性樹脂中。
Giemsa顯帶法
1.預(yù)處理:將標(biāo)本置入60~80℃溫箱或烤箱中20~30分鐘,亦可在37℃溫箱過夜。
2.*消化:用0.85%的NaCl配制0.25%*溶液消化3~5分鐘。
3.染色:取出標(biāo)本片,先直立于吸水紙上除去多余*液后,隨即置入Giemsa染液中,染10分鐘。
4.封片:自來水洗,蒸餾水漂洗,晾干,二甲苯透明2~3分鐘,封入中性樹膠中。
2)姐妹染色單體分化染色
BUdR摻入和制片程序
1.BUdR培養(yǎng)液制備:先制備好含BUdR的培養(yǎng)液(zui終濃度為3~10微克/毫升)。
2.BUdR摻入:如用傳代細(xì)胞,在末次傳代后,改換用含BUdR的培養(yǎng)液培養(yǎng)。如為人末梢血細(xì)胞,一開始就用含BUdR培養(yǎng)液培養(yǎng)(培養(yǎng)瓶放在特制黑色木盒、黑布中或黑紙包裹)37℃溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
3.中止摻入與制片:待細(xì)胞經(jīng)歷兩個(gè)細(xì)胞周期(人周圍血細(xì)胞培養(yǎng)48或72小時(shí))