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所 在 地上海市
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更新時(shí)間:2024-03-21 12:42:44瀏覽次數(shù):373次
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產(chǎn)品名稱(chēng):MT,豬褪黑素ELISA試劑盒技術(shù)指導(dǎo)
產(chǎn)品規(guī)格:96T/48T
保存條件:2-8℃.
產(chǎn)品庫(kù)存:現(xiàn)貨供應(yīng)
檢測(cè)目的:用于測(cè)定血清,血漿及相關(guān)液體等樣本。例如適合檢測(cè)包括血清、血漿、尿液、胸腹水、灌洗液、腦脊液、細(xì)胞培養(yǎng)上清、組織勻漿等標(biāo)本.
檢測(cè)種屬:大小鼠、人、豚鼠、兔子、豬、犬、牛羊、雞鴨elisa試劑盒等種屬
檢測(cè)方法:酶聯(lián)免疫法/酶免法(elisa)
適用范圍:僅供科研使用,不得用于臨床
類(lèi)型
ELISA可用于測(cè)定抗原,也可用于測(cè)定抗體。在這種測(cè)定方法中有三個(gè)必要的試劑:(1)固相的抗菌素原或抗體,即"免疫吸附劑"(immunosorbent);(2)酶標(biāo)記的抗原或抗體,稱(chēng)為"結(jié)合物"(conjugate);(3)酶反應(yīng)的底物。根據(jù)試劑的來(lái)源和標(biāo)本的情況以及檢測(cè)的具體條件,可設(shè)計(jì)出各種不同類(lèi)型的檢測(cè)方法。用于臨床檢驗(yàn)的ELISA主要有以下幾種類(lèi)型:
雙抗原夾心法測(cè)抗體
反應(yīng)模式與雙抗體夾心法類(lèi)似。用特異性抗原進(jìn)行包被和制備酶結(jié)合物,以檢測(cè)相應(yīng)的抗體。與間接法測(cè)抗體的不同之處為以酶標(biāo)抗原代替酶標(biāo)抗抗體。此法中受檢標(biāo)本不需稀釋?zhuān)芍苯佑糜跍y(cè)定,因此其敏感度相對(duì)高于間接法。乙肝標(biāo)志物中抗HBs的檢測(cè)常采用本法。本法關(guān)鍵在于酶標(biāo)抗原的制備,應(yīng)根據(jù)抗原結(jié)構(gòu)的不同,尋找合適的標(biāo)記方法。
間接法測(cè)抗體
間接法是檢測(cè)抗體常用的方法。其原理為利用酶標(biāo)記的抗抗體(抗人免疫球蛋白抗體)以檢測(cè)與固相抗原結(jié)合的受檢抗體,故稱(chēng)為間接法(見(jiàn)圖2-3)。操作步驟如下:
1)將特異性抗原與固相載體聯(lián)結(jié),形成固相抗原。洗滌除去未結(jié)合的抗原及雜質(zhì)。
2)加稀釋的受檢血清,保溫反應(yīng)。血清中的特異抗體與固相抗原結(jié)合,形成固相抗原抗體復(fù)合物。經(jīng)洗滌后,固相載體上只留下特異性抗體,血清中的其他成份在洗滌過(guò)程中被洗去。
3)加酶標(biāo)抗抗體??捎妹笜?biāo)抗人Ig以檢測(cè)總抗體,但一般多用酶標(biāo)抗人IgG檢測(cè)IgG抗體。固相免疫復(fù)合物中的抗體與酶標(biāo)抗體抗體結(jié)合,從而間接地標(biāo)記上酶。洗滌后,固相載體上的酶量與標(biāo)本中受檢抗體的量正相關(guān)。
4)加底物顯色
本法主要用于對(duì)病原體抗體的檢測(cè)而進(jìn)行傳染病的診斷。間接法的優(yōu)點(diǎn)是只要變換包被抗原就可利用同一酶標(biāo)抗抗體建立檢測(cè)相應(yīng)抗體的方法。
間接法成功的關(guān)鍵在于抗原的純度。雖然有時(shí)用粗提抗原包被也能取得實(shí)際有效的結(jié)果,但應(yīng)盡可能予以純化,以提高試驗(yàn)的特異性。特別應(yīng)注意除去能與一般健康人血清發(fā)生反應(yīng)的雜質(zhì),例如以E.Coli為工程酶的重組抗原,如其中含有E.Coli成份,很可能與受過(guò)E.Coli感染者血甭中的抗E.Coli抗體發(fā)生反應(yīng)??乖幸膊荒芎信c酶標(biāo)抗人Ig反應(yīng)的物質(zhì),例如來(lái)自人血漿或人體組織的抗原,如不將其中的Ig去除,試驗(yàn)中也發(fā)生假陽(yáng)性反
應(yīng)。另外如抗原中含有無(wú)關(guān)蛋白,也會(huì)因竟?fàn)幬蕉绊懓恍Ч?/span>
間接法中另一種干擾因素為正常血清中所含的高濃度的非特異性。病人血清中受檢的特異性IgG只占總IgG中的一小部分。IgG的吸附性很強(qiáng),非特異IgG可直接吸附到固相載體上,有時(shí)也可吸附到包被抗原的表面。因此在間接法中,抗原包被后一般用無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)(例如牛血清蛋白)再包被一次,以封閉(blocking)固相上的空余間隙。另外,在檢測(cè)過(guò)程中標(biāo)本須先行稀釋?zhuān)?:40~1:200),以避免過(guò)高的陰性本底影響結(jié)果的判斷。
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