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ATPase,人ATP酶ELISA試劑盒供應商
實驗原理
試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗(ELISA)。往預先包被人ATP酶(ATPase)捕獲抗體的包被微孔中,依次加入標本、標準品、HRP標記的檢測抗體,經過溫育并*洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人ATP酶(ATPase)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度。
標本收集
1. 本試劑盒可使用血清、血漿、細胞培養(yǎng)上清液、組織液標本。
2. 室溫(20-25℃)下保存標本不要超過8小時。2-10℃保存標本,不超過48小時。如
耽擱的時間更長,請在-20℃或更低的溫度下保存標本。標本避免多次凍融,這樣可能會損失蛋白活性,產生錯誤結果。
準備工作
1. 濃縮洗滌液(20X)用雙蒸水稀釋成1X(至 500ml)。
操作步驟
試劑盒應平衡至室溫(20-25°C )再試驗。 取出所需反應板。
1. 加入10ul標準品(Standards)、10ul標本于相應反應板孔中。
2. 每孔加入40ul Anti mouse IL-1 Biotin 和40ul Anti mouse IL-1 POD。輕輕混勻30秒,封
住板孔,室溫溫育 45分鐘。
3. 洗板:甩盡板內液體,用洗滌液洗滌反應板(每孔內加入350ul洗滌液),并去除水滴
(在厚疊吸水紙上拍干);反復洗滌5次。
4. 每孔加入100ul顯色液, 輕輕混勻10秒,室溫溫育20分鐘。
5. 每孔加入100ul終止液(Stop Solution)。輕輕混勻30秒;30分鐘內在450nm處讀OD
值。
以OD值為縱坐標,以標準品濃度為橫坐標,繪制標準曲線。根據樣品的OD值可在標準曲線上查出其濃度。
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