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ELISA試劑盒樣本的處理方案,不要錯過哦!

時間:2015-12-9閱讀:689
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ELISA 檢測的目的是為實驗提供準(zhǔn)確可靠的定量分析實驗依據(jù)。為了保證實驗數(shù)據(jù)的可靠性,在實驗過程中必須堅持全面質(zhì)量控制和全過程質(zhì)量控制。在收集標(biāo)本前都必須有一個完整的計劃。ELISA樣本的處理是elisa試劑盒實驗關(guān)鍵的步驟!
標(biāo)本類型:

ELISA 常見的標(biāo)本一般包括:
◆ 液體類標(biāo)本:包括血清、血漿、尿液、胸腹水、腦脊液、細胞培養(yǎng)上清等。
◆ 培養(yǎng)細胞
◆ 組織標(biāo)本
這些標(biāo)本收集的時間、方法和保存都有一定的要求。

標(biāo)本的保存:

一般說來,在5天內(nèi)測定的標(biāo)本可放置于 4℃,超過一周測定的需低溫凍存。
對收集后當(dāng)天進行檢測的標(biāo)本,儲存在 4℃?zhèn)溆?,如有特殊原因需要周期收集?biāo)本,將標(biāo)本及時分裝后放在 -20℃或 -70℃條件下保存。避免反復(fù)凍融。 
標(biāo)本2-8℃ 可保存48小時,-20℃可保存1個月,-70℃可保存6個月。
部分標(biāo)本也可加入適當(dāng)防腐劑,激素類標(biāo)本需添加抑肽酶。

樣本的處理:

◆ 血清: 
室溫血液自然凝固 10-20 分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 血漿: 
應(yīng)根據(jù)試劑盒的要求選擇 EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑,加入10 %(v/v)抗凝劑(0.1M 檸檬酸鈉或1% heparin 或 2.0%EDTA.Na2)混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 尿液、胸腹水、腦脊液: 
用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。
◆ 細胞培養(yǎng)上清: 
檢測分泌性的成份時,用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。
檢測細胞內(nèi)的成份時,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液,細胞濃度達到100萬/ml 左右。通過反復(fù)凍融,以使細胞破壞并放出細胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。 
◆ 細胞: 
檢測細胞的成份時,對于貼壁細胞,去除培養(yǎng)液,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍。加入適量裂解液。用槍吹打數(shù)下,使裂解液和細胞充分接觸。
通常裂解液接觸細10秒后,細胞就會被裂解。
對于懸浮細胞,離心收集細胞,用PBS、生理鹽水或無血清培養(yǎng)液洗一遍.加入適量裂解液, 用槍吹打把細胞吹散。用手指輕彈以充分裂解細胞。充分裂解后應(yīng)沒有明顯的細胞沉淀。
如果細胞量較多,必需分裝然后再裂解。充分裂解后,10000-14000g離心3-5分鐘,取上清,即可進行后續(xù)操作。
◆ 組織標(biāo)本: 
切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的 PBS 或組織蛋白萃取試劑,緩沖液中可加入蛋白酶抑制劑。用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細收集上清置于 -20度或 -70度保存,如有必要,可以將樣品濃縮干燥。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

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