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細(xì)胞培養(yǎng)現(xiàn)在已成為應(yīng)用于生命科學(xué)的主要技術(shù)之一,它是從生物機體中取出部分組織分散成單個細(xì)胞或直接從機體取出單個細(xì)胞,并將它們在有利于生長的人工環(huán)境中培養(yǎng)的統(tǒng)稱。細(xì)胞最適生長的基本環(huán)境是適當(dāng)?shù)臏囟龋己玫募?xì)胞附著基質(zhì)和適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液和培養(yǎng)箱,能夠保持正確的pH值和滲透壓。
在動物細(xì)胞培養(yǎng)中最重要和最關(guān)鍵的一步是選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液用于體外培養(yǎng)。生長培養(yǎng)基或培養(yǎng)基是液體或凝膠狀態(tài)的,設(shè)計用于支持微生物、細(xì)胞或小的植株生長。培養(yǎng)基是控制最佳的細(xì)胞生長最重要和最復(fù)雜的因素。細(xì)胞培養(yǎng)基通常包括適當(dāng)?shù)募?xì)胞能量來源和調(diào)節(jié)細(xì)胞周期的化合物。一個典型的培養(yǎng)基還需要補充氨基酸,維生素,無機鹽,葡萄糖,和血清,以提供生長因子、激素、和附著因子。除了營養(yǎng)外,培養(yǎng)基也有助于保持培養(yǎng)體系中的pH值和滲透壓平衡。
一、細(xì)胞培養(yǎng)基的類型:
動物細(xì)胞的培養(yǎng)可以使用chun天然的培養(yǎng)基或人工/合成的培養(yǎng)基混合一些天然產(chǎn)物。
1. 天然培養(yǎng)基
天然培養(yǎng)基僅由天然生成的生物液體組成。天然培養(yǎng)基適用于多種不同的動物細(xì)胞培養(yǎng)。但由于缺乏對這些天然培養(yǎng)基確切成分的認(rèn)識,使用天然培養(yǎng)基的主要缺點是可重復(fù)性差。
2. 人工培養(yǎng)基
人工培養(yǎng)基通過人為地加入一些營養(yǎng)物質(zhì)(有機的和無機的)、維生素、鹽、O2和CO2氣體、血清蛋白、碳水化合物、輔因子,制備成人工或合成的培養(yǎng)基。
不同的人工培養(yǎng)基被分別設(shè)計用于下面的幾個用途:
1)及時生存(平衡的鹽溶液,有特定的pH和滲透壓);
2)長時間生存(ping衡鹽溶液輔以各種配方的有機化合物和/或血清) ;
3)不確定生長 ;
4)特定功能。
二、培養(yǎng)基中的血清:
血清是白蛋白、生長因子和生長抑制劑的復(fù)雜混合體。血清是細(xì)胞培養(yǎng)基中最重要的組分之一,作為氨基酸、蛋白質(zhì)、維生素(特別是zhi溶性維生素,如A,D,E,和K)、碳水化合物、脂質(zhì)、激素、生長因子、礦物質(zhì)和微量元素的來源。通常會在培養(yǎng)基中使用胎兒和小牛來源的血清來支持細(xì)胞生長。胎兒血清含有豐富的生長因子,適當(dāng)細(xì)胞克隆和難以培養(yǎng)的細(xì)胞的生長。胎兒血清被用于接觸抑制研究,因為它較低的生長促進(jìn)特性。正常的生長培養(yǎng)基往往包含2-10%的胎兒血清。
培養(yǎng)基中補充血清具有以下作用:
1)血清未細(xì)胞提供了基本的營養(yǎng)成分(在溶液中和結(jié)合到蛋白質(zhì)上的)。
2)血清為生長促進(jìn)和特定細(xì)胞功能提供多種生長因子和激素。
3)提供了多種結(jié)合蛋白質(zhì),如白蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白,可以攜帶其他成分進(jìn)入細(xì)胞。例如:白蛋白可攜帶脂類、維生素、激素等進(jìn)入細(xì)胞。
4)還可提供蛋白質(zhì),如纖連蛋白,促進(jìn)細(xì)胞附著到基質(zhì)上。它提供擴散因子幫助細(xì)胞在分裂前擴散。
5)提供蛋白酶抑制劑,保護(hù)細(xì)胞免受降解。
6)提供礦物質(zhì),如Na+,K+,Zn2 +,F(xiàn)e2 +等。
7)增加培養(yǎng)基的粘性,因此保護(hù)細(xì)胞在懸浮培養(yǎng)攪拌過程中免受機械損傷。
8)還可以作為一種緩沖液。
由于存在生長因子和酶抑制劑,血清在細(xì)胞培養(yǎng)中的作用是非常復(fù)雜的。除了提供各種功能,在組織培養(yǎng)中使用血清也存在優(yōu)缺點。
1.培養(yǎng)基中使用血清的優(yōu)點:
①血清包含多種生長因子和激素,可以刺激細(xì)胞生長和發(fā)揮功能
②可幫助細(xì)胞附著
③可作為擴散因子
④作為緩沖劑幫助維持生長培養(yǎng)基的pH值
⑤可作為結(jié)合蛋白
⑥減小機械損傷或由攪拌造成的損傷
2.培養(yǎng)基中使用血清的缺點:
①血清成分缺乏均一性
②在使用每一批前都需要檢測以確保質(zhì)量
③可能包含一些生長抑制因子
④增加污染的可能
⑤培養(yǎng)基中存在血清可能干擾細(xì)胞培養(yǎng)產(chǎn)物的純度和分離
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