人臍靜脈內皮細胞 , ECV-304細胞5×10^5以上/1ml
對于大多數(shù)細胞研究工作者來說，人臍靜脈內皮細胞 , ECV-304細胞污染那可是個糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們如何防范，如何避免，是我們要學習和掌握的。
我妻氏培養(yǎng)基基礎 250 用于神奈川現(xiàn)象試驗（SN標準）
60%/L氯化鈉蛋白胨肉湯 250 用于副溶血性弧菌的前增菌培養(yǎng)（SN標準）
氯化鈉三糖鐵 250 用于副溶血性弧菌的生化反應篩選（SN標準）
人臍靜脈內皮細胞 , ECV-304細胞胰胨大豆瓊脂斜面（TSA） 250 培養(yǎng)副溶血性弧菌，做細胞色素氧化酶實驗（SN標準）
42℃生長培養(yǎng)基 250 用于副溶血性弧菌42℃生長試驗（SN標準）
O/F培養(yǎng)基（HLGB） 250 用于鑒別弧菌葡萄糖代謝類型（發(fā)酵型或氧化型）（SN標準）
氯化鈉結晶紫增菌液 250 用于副溶血性弧菌的選擇性增菌培養(yǎng)（GB標準）
氯化鈉蔗糖瓊脂 250 用于副溶血性弧菌的選擇性分離培養(yǎng)（GB標準）
下面我們對細胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個總結：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細小的點狀物數(shù)量非常多，輕微活動，細胞雖然可以生長但繁殖速度卻明顯減慢，而且細胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細胞不透亮。他們與細胞可共生但會與細胞爭奪營養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細胞站優(yōu)勢所以不會影響到細胞的正常生長，只有當他們到達一定的數(shù)量時就會影響到細胞的生長，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質，鏡下可見呈細絲狀的團狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細胞仍可生長，但時間長之后，細胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅?；蛘咴谂囵B(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細胞暫時轉移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內一個小時，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細胞。孵箱應定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補，建議舍棄該污染細胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細菌：細菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細沙狀，根據(jù)感染細菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會渾濁變黃，對細胞生長影響明顯。仔細檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時放氣時間足夠，壓力足夠！尤其是和儲存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會太影響，細胞還是可以用的。常常是細胞生長狀態(tài)良好，且觀測到的運動物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號的血清養(yǎng)的細胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對細胞生長狀態(tài)不會有明顯影響，在細胞增殖旺盛之后會自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細胞有可能是此種污染的話，可以增加細胞的種板密度，以提高細胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細胞碎片分不清，慢慢的會長出很細的黑色絲狀物。真菌生長的比較慢，不象細菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會渾濁，原體感染，國內血清很多都沒有做支原體陰性檢測，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細胞以后，細胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細胞培養(yǎng)，無任何不良反應。Sigma公司的使用時用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細胞），37度試培養(yǎng)一段時間后觀察。如果沒有細菌生長就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時會影響細胞的狀態(tài)，所以在做轉染、檢測細胞某項指標前一定要撤去雙抗，以避免影響實驗結果。1、孵箱應定期用三氧機消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時孵箱內的水應是三蒸水2、超凈臺\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺的風機不能過大，風機到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時即可進入操作。
皰肉牛肉粒 100 加入皰肉基礎ˇ配成皰肉培養(yǎng)基
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎 250 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎添加劑 250 每支加入225ml緩沖李氏菌增菌肉湯基礎中
PALCAM 瓊脂 250 用于單增李氏菌選擇性分離（FDA標準）
LPM瓊脂 250 用于單增李氏菌選擇性分離（加入七葉苷和檸檬酸鐵銨）（FDA標準）
Half –Fraser 培養(yǎng)基 250 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)
Fraser 培養(yǎng)基 250 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)
UVM培養(yǎng)基 250g 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)（FDA標準）
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎 250g 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)（Merck方法）
緩沖李氏菌增菌肉湯基礎添加劑 1ml*5支 每支加入225ml緩沖李氏菌增菌肉湯基礎中
PALCAM瓊脂 250g 用于單增李氏菌選擇性分離（FDA標準）
PALCAM添加劑 1ml/支*10 添加到HB4188中，用于李氏菌的選擇性分離培養(yǎng)
LPM瓊脂 250g 用于單增李氏菌選擇性分離（加入七葉苷和檸檬酸鐵銨）（FDA標準）
Half Fraser 培養(yǎng)基 250g 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)（Merck方法）
Half Fraser 添加劑 5ml*2 添加到HB4190中，用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
改良緩沖蛋白胨水（MBP） 250g 用于單增李氏菌前增菌分離（SN標準）
EB增菌液 250g 用于單增李氏菌選擇性增菌培養(yǎng)（SN標準）
Fraser培養(yǎng)基 250g 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)（MERCK方法）
Fraser添加劑 5ml*3支 添加到HB4193中，用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
UVM培養(yǎng)基 250g 用于李氏菌的增菌培養(yǎng)（MERCK方法）
UVM添加劑1 1ml*10支 添加到HB4195中，用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
LM-137瓊脂 250g 用于濾膜法單增李氏菌選擇性分離（NEOGEN標準）
堿性蛋白胨水 250 用于霍亂弧菌選擇性增菌培養(yǎng)（SN標準）
TCBS瓊脂 250 用于致病性弧菌的選擇性分離（GB、SN標準）
氯化鈉*肉湯基礎（SCPB） 250 用于副溶血性弧菌選擇性增菌培養(yǎng)，用前應無菌加入*（SN標準）
* 2.5萬單位/支*5 添加于100mlHB131中
*瓊脂 250 用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)
四號瓊脂基礎 250 用于霍亂弧菌選擇性分離培養(yǎng)，滅菌冷至50℃加入亞碲酸鉀，倒平板