人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤 , SH-SY5Y細(xì)胞5×10^5以上/1ml
對(duì)于大多數(shù)細(xì)胞研究工作者來說，人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤 , SH-SY5Y細(xì)胞污染那可是個(gè)糟糕的事情，也是比較容易出現(xiàn)的情況，我們?nèi)绾畏婪?，如何避免，是我們要學(xué)習(xí)和掌握的。
骨織素（OSTN）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Osteocrin （OSTN） Homo sapiens （Human）
軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Cartilage Oligomeric Matrix Protein （COMP） Homo sapiens （Human）
人骨髓神經(jīng)母細(xì)胞瘤 , SH-SY5Y細(xì)胞軟骨寡聚基質(zhì)蛋白（COMP）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Cartilage Oligomeric Matrix Protein （COMP） Rattus norvegicus （Rat）
溶酶體關(guān)聯(lián)膜蛋白2（LAMP2）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Lysosomal Associated Membrane Protein 2 （LAMP2） Mus musculus （Mouse）
血管緊張素1-7（Ang1-7）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Angiotensin 1-7 （Ang1-7） Canis familiaris; Canine （Dog）
下面我們對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)中常見的污染情況，做個(gè)總結(jié)：
1）原蟲：培養(yǎng)液可輕微渾濁，顯微鏡下那些細(xì)小的點(diǎn)狀物數(shù)量非常多，輕微活動(dòng)，細(xì)胞雖然可以生長(zhǎng)但繁殖速度卻明顯減慢，而且細(xì)胞狀態(tài)不好，邊緣不清楚，細(xì)胞不透亮。他們與細(xì)胞可共生但會(huì)與細(xì)胞爭(zhēng)奪營(yíng)養(yǎng)。這種共生是非常普遍的，但他們的數(shù)量小，細(xì)胞站優(yōu)勢(shì)所以不會(huì)影響到細(xì)胞的正常生長(zhǎng)，只有當(dāng)他們到達(dá)一定的數(shù)量時(shí)就會(huì)影響到細(xì)胞的生長(zhǎng)，zui終形成惡性循環(huán)。
2）霉菌：培養(yǎng)液是清亮的，倒置顯微鏡下無雜質(zhì)，37度孵箱培養(yǎng)2-3天，仍清亮，但出現(xiàn)絮狀雜質(zhì)，鏡下可見呈細(xì)絲狀的團(tuán)狀漂浮物，可看到明顯的菌絲，細(xì)胞仍可生長(zhǎng)，但時(shí)間長(zhǎng)之后，細(xì)胞的活力狀態(tài)變差，用硫酸銅溶液擦拭CO2孵箱內(nèi)，再把水盤里也加上飽和量的硫酸銅。或者在培養(yǎng)箱的托盤加入飽和的消毒*高鹽液體,可以防止霉菌污染。CO2孵箱被霉菌污染后，可把所有細(xì)胞暫時(shí)轉(zhuǎn)移，采用過氧乙酸擦洗孵箱（包括隔板，箱壁）。并把過氧乙酸放置在孵箱內(nèi)一個(gè)小時(shí)，使其蒸汽彌漫。待過氧乙酸的氣味消散后，再移入細(xì)胞。孵箱應(yīng)定期清潔（2月左右），尤其在多雨的季節(jié)。其它培養(yǎng)箱清洗方法是：用84液擦洗－清水擦洗－75%酒精擦洗－紫外燈照。預(yù)防霉菌污染，可在培養(yǎng)基里加3u/ml的兩性霉素或*或*或雙抗；但細(xì)胞一旦污染，很難挽救，*或*或雙抗都于事無補(bǔ)，建議舍棄該污染細(xì)胞。，將環(huán)境*消毒，如果所有細(xì)胞都污染，可能是系統(tǒng)污染，檢查一下培養(yǎng)基和器材，如果只是個(gè)別污染，可能是操作問題，就要注意操作。
3）細(xì)菌：細(xì)菌在普通倒置顯微鏡下為黑色細(xì)沙狀，根據(jù)感染細(xì)菌的不同，可有不同的外形，培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁變黃，對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)影響明顯。仔細(xì)檢查一下器皿的滅菌情況，是否在高壓滅菌時(shí)放氣時(shí)間足夠，壓力足夠！尤其是和儲(chǔ)存培養(yǎng)液接觸的移液管等物品，連續(xù)兩次污染的話有可能造成儲(chǔ)存液污染，一定要注意！下次使用前檢查一下培養(yǎng)液是否存在渾濁的現(xiàn)象！ 可在培養(yǎng)液中加相應(yīng)的抗生素處理
4）黑蛟蟲：可以穿透濾膜，也可以通過空氣傳播，低倍下為黑色點(diǎn)狀，高倍下可看見黑色的小蟲游來游去，培養(yǎng)液也是不渾的，一般不會(huì)太影響，細(xì)胞還是可以用的。常常是細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，且觀測(cè)到的運(yùn)動(dòng)物無明顯增多，且培養(yǎng)液顏色、透明度無明顯變化，可在同一批號(hào)的血清養(yǎng)的細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)類似現(xiàn)象。對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不會(huì)有明顯影響，在細(xì)胞增殖旺盛之后會(huì)自然消失，除更換血清外無須特殊處理。建議如果細(xì)胞有可能是此種污染的話，可以增加細(xì)胞的種板密度，以提高細(xì)胞的生存率。
5）真菌：一般培養(yǎng)液清亮，不變色，鏡下有絲狀物，有些真菌開始很像死細(xì)胞碎片，只是它很多很多的小塊很清楚，象珊瑚狀，不象細(xì)胞碎片分不清，慢慢的會(huì)長(zhǎng)出很細(xì)的黑色絲狀物。真菌生長(zhǎng)的比較慢，不象細(xì)菌那么容易被發(fā)現(xiàn)，但是一旦發(fā)現(xiàn)有它的存在細(xì)胞就被污染了，也很難救活了。
6）支原體：黑色的，好象多為多形，培養(yǎng)液一般培養(yǎng)液一般會(huì)渾濁，原體感染，國(guó)內(nèi)血清很多都沒有做支原體陰性檢測(cè)，而支原體是牛血清中zui常見的微生物之一。而且它不能用過濾的辦法除去。支原體感染細(xì)胞以后，細(xì)胞病變不很明顯，只是慢慢死去。用泰樂菌素，獸用支原體病的藥，但可用于細(xì)胞培養(yǎng)，無任何不良反應(yīng)。Sigma公司的使用時(shí)用50ug/ml Tylosin培養(yǎng)液培養(yǎng)6天或連續(xù)傳兩代即可清除支原體污染。如果作為常用的抗生素的話, 建議用8ug/ml的濃度。
污染的可能原因：可能原因很多比如配液消毒問題、操作問題、環(huán)境問題等等關(guān)于培養(yǎng)基的無菌狀況，取培養(yǎng)基至培養(yǎng)瓶中（不加細(xì)胞），37度試培養(yǎng)一段時(shí)間后觀察。如果沒有細(xì)菌生長(zhǎng)就是操作的問題。 也可以在培養(yǎng)基中事先加入雙抗（*和氨芐*）。但雙抗有時(shí)會(huì)影響細(xì)胞的狀態(tài)，所以在做轉(zhuǎn)染、檢測(cè)細(xì)胞某項(xiàng)指標(biāo)前一定要撤去雙抗，以避免影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。1、孵箱應(yīng)定期用三氧機(jī)消毒或者 紫外光照射，并用酒精和新潔爾滅試擦孵箱同時(shí)孵箱內(nèi)的水應(yīng)是三蒸水2、超凈臺(tái)\取材\器材\培養(yǎng)液\培養(yǎng)瓶\操作等因素3、超凈臺(tái)的風(fēng)機(jī)不能過大，風(fēng)機(jī)到6-8格。否則也可能能致霉菌污染4、無菌室經(jīng)甲醛熏蒸消毒后，可用同等量的氨水噴灑中和，約幾小時(shí)即可進(jìn)入操作。
組織蛋白酶D（CTSD）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Cathepsin D （CTSD） Mus musculus （Mouse）
組織轉(zhuǎn)*酶（TGM2）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Transglutaminase 2, Tissue （TGM2） Mus musculus （Mouse）
β-1,4-半乳糖轉(zhuǎn)移酶1（β4GALT1）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Beta-1,4-Galactosyltransferase 1 （b4GALT1） Mus musculus （Mouse）
*原片段F1+2（F1+2）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Prothrombin Fragment 1+2 （F1+2） Rattus norvegicus （Rat）
*1（VB1）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Vitamin B1 （VB1） General
低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha （HIF1a） Homo sapiens （Human）
低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha （HIF1a） Mus musculus （Mouse）
低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha （HIF1a） Sus scrofa; Porcine （Pig）
低氧誘導(dǎo)因子1α（HIF1α）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Hypoxia Inducible Factor 1 Alpha （HIF1a） Rattus norvegicus （Rat）
上皮中性粒細(xì)胞激活肽78（ENA78）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 （ENA78） Homo sapiens （Human）
上皮中性粒細(xì)胞激活肽78（ENA78）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Epithelial Neutrophil Activating Peptide 78 （ENA78） Mus musculus （Mouse）
凋亡蛋白酶激活因子1（APAF1）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Apoptotic Peptidase Activating Factor 1 （APAF1） Homo sapiens （Human）
趨化因子C-C-基元配體14（CCL14）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Chemokine C-C-Motif Ligand 14 （CCL14） Homo sapiens （Human）
白介素31（IL31）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Interleukin 31 （IL31） Mus musculus （Mouse）
白介素19（IL19）檢測(cè)試劑盒（化學(xué)發(fā)光免疫分析法） CLIA Kit for Interleukin 19 （IL19） Homo sapiens （Human）