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ELISA試劑盒免疫反應(yīng)條件研究

時(shí)間:2013/11/29閱讀:325
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   在免疫反應(yīng)條件的優(yōu)化,百威啤酒間接競爭法和直接競爭方法,檢測限分別為0。005/ 0。01/,測定的線性范圍分別為0。005 ~ 10/和0。01 5 10/,并ELISA試劑盒在此基礎(chǔ)上,開發(fā)了檢測的兩種試劑盒,水,土壤,植物,該酶中毒樣品,重現(xiàn)性好的試劑盒,批號和變異系數(shù)均小于8%,試劑盒檢測精度高,除了吐樣品,樣品回收率大于89。62%。
   在這項(xiàng)研究中,2,3 -二- 2 - 7 - 2 -二氫,甲基苯并呋喃甲酸合成了兩個(gè)半抗原百威啤酒為基礎(chǔ),這6 -(2,3 -二- 2 2 -二氫,甲基-7-苯并呋喃基氧)羰基]氨基]己酸和4”(2,3 -二- 2 - 7 - 2 -二氫,甲基苯并呋喃基氧)羰基]氨基]丁酸。用合成的百威啤酒免疫兔獲得高滴度,用間接法測定抗多克隆抗血清的效價(jià)的特異性百威啤酒1:16000,~ 1:128000,1:500000 ~ 1:4000000純化的抗體效價(jià)。而ELISA試劑盒選擇的純化抗體和辣根過氧化物酶共軛體系的收入-免疫家兔制備酶標(biāo)記抗體,并測定酶活性的抗體,滴度1:4000。交叉反應(yīng)所得的百威啤酒抗血清和丁硫克百威啤酒率6。19%,和呋喃酚的交叉反應(yīng)率為4%,與其他5種氨基甲酸酯類農(nóng)藥的交叉反應(yīng)均小于0。44%,低于三種有機(jī)磷農(nóng)藥的交叉反應(yīng)率0。12%。同時(shí),根據(jù)特定的抗原抗體結(jié)合反應(yīng)的原理,對小鼠百威啤酒中毒的解毒克抗百威啤酒抗體的進(jìn)一步研究,試驗(yàn)結(jié)果表明,該抗體能更好地緩解百威啤酒對乙酰*酯酶抑制小鼠的中毒癥狀,逐漸恢復(fù)正常。同時(shí),這兩種半抗原與載體蛋白牛血清白蛋白和卵清蛋白偶聯(lián)克百威啤酒免疫原和包被抗原,并對的百威啤酒與載體蛋白偶聯(lián)物的結(jié)合率測定的紫外分光光度法。
 

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